[发明专利]一种利用啤酒废液生产酵母发酵态铁饲料添加剂的方法

权利要求书

1.一种利用啤酒废液生产酵母发酵态铁饲料添加剂的方法，所用的发酵菌种为啤酒酵母和产朊假丝酵母，所用的铁为可溶解在稀酸溶液中的无机铁化合物，其特征在于：包括如下步骤：

（1）培养基制备以及微生物培养

取葡萄糖20g、蛋白胨20g、酵母浸膏10g、琼脂20g，用蒸馏水溶解、定容至1000mL，用高压锅在121℃灭菌20min-30min，调pH至5.0~5.5，制得培养基，然后将啤酒酵母和产朊假丝酵母从冰箱取出复苏，培养于该培养基上24h，以获得复活的啤酒酵母和产朊假丝酵母；

（2）基础液体培养基与铁梯度培养基制备

基础液体培养基的制法为：依次向1000ml蒸馏水中加入葡萄糖20g、蛋白胨20g以及酵母浸膏10g，并搅拌混匀，调整pH至5.0~5.2，备用；

铁梯度培养基的制法为：在上述基础液体培养基中加入可溶解在稀酸溶液中的无机铁化合物，得到铁含量分别为50mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L和1000mg/L的培养基，并与铁含量为0mg/L的基础液体培养基构成铁梯度培养基，备用；

（3）微生物梯度培养

将步骤（1）处理所获得的啤酒酵母和产朊假丝酵母分别依次培养于步骤（2）所制得铁梯度培养基中，培养时间为24h，培养温度为30.5℃；

（4）种子培养基的制备

获取啤酒生产过程中新鲜的糖化废液，在4000r/min转速下离心5~10min，然后按照重量比添加3.5%的蔗糖、0.3%的尿素、0.25%的食盐、0.02%的硫化钠，混匀后121℃灭菌15~20min，并调pH至5.0~5.5，即制成种子培养基，并将其平均分做两份，备用；

（5）发酵种子的制备

将经过步骤（3）处理的啤酒酵母和产朊假丝酵母按照10%的接种比例分别接种于步骤（4）所制备的两份种子培养基中，一份种子培养基接种一种酵母菌，然后将接种后的培养基放置于30.5℃的恒温培养箱内培养24h，即获得啤酒酵母发酵种子和产朊假丝酵母发酵种子；

（6）发酵液的制备

发酵液是利用啤酒生产过程中的糖化废液或发酵废液制成的，具体制备方法如下：

a、利用糖化废液制作发酵液：取啤酒生产过程中新鲜的糖化废液，在3500~4000r/min转速下离心5~10min，然后按照重量比依次加入1.0%的蔗糖、20%的玉米面、0.3%的尿素、0.25%的食盐以及0.02%的硫化钠，并于121℃灭菌15~20min，调整pH至5.0~5.5，即可制成发酵液；

b、利用发酵废液制作发酵液：取啤酒生产过程中新鲜的发酵废液，在3500~4000r/min转速下离心5~10min，再在60~65℃水浴锅内水浴加热30~40min，加热期间不断用灭菌的玻璃棒搅拌，使发酵废液中残留的乙醇挥发，同时达到灭菌效果，然后按照重量比，向灭菌后的发酵废液中加入 2.0%的蔗糖、20%的玉米面、0.5%的尿素、0.25%的食盐以及0.02%的硫化钠，并调整pH至5.0~5.5，即可制成发酵液；

（7）微生物发酵

将待发酵的无机铁化合物按照重量取其中的20%混合在步骤（6）所制得发酵液中，置于发酵容器内，并按照10%的接种比例向发酵容器内的发酵液中接种步骤（5）所制得的啤酒酵母发酵种子和产朊假丝酵母发酵种子，然后调节温度至30.5℃进行发酵，2h后，向发酵容器内再次加入20%的待发酵的无机铁化合物，并搅拌均匀，再继续发酵至6h后，再次加入20%的待发酵的无机铁化合物，搅拌均匀，使发酵培养基中铁含量达到1200mg/L，继续发酵至12h后，加入剩余的40%的待发酵的无机铁化合物，搅拌均匀，继续发酵24h，即合计发酵时间36h后，完成发酵过程；

（8）酵母发酵态铁饲料添加剂的制作

将步骤（7）所得的发酵产物进行过滤，收取固体物，所得滤液在3500~4000r/min条件下离心10min，获得固体沉淀物，然后将过滤所得的固体物和离心所得的固体沉淀物混合均匀，置于65℃电热恒温干燥箱内进行干燥处理，干燥后用粉碎机将其粉碎并过60目筛，从而获得酵母发酵态铁饲料添加剂；

（9）包装

以1000g为单位，将步骤（8）所获得的酵母发酵态铁饲料添加剂用复合薄膜进行真空包装，真空度为0.085~0.095Mpa。