[发明专利]抑制靶基因表达的组合物

说明书

本申请是中国专利申请号为200980130771.X(PCT申请号为PCT/JP2009/063685，PCT公开号为WO2010/013815)、申请日为2009年7月31日、发明名称为“抑制靶基因表达的组合物”的中国发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及用于抑制靶基因表达的组合物等。

背景技术

作为抑制靶基因表达的方法，已知例如利用RNA干涉(RNAinterference，以下称为RNAi)的方法等，具体而言，有报道指出通过在线虫中导入具有与靶基因相同的序列的双链RNA，可特异性地抑制该靶基因表达的现象[参见“自然(Nature)”，1998年，第391卷、第6669号，p.806-811]。另外，发现通过在果蝇中导入21～23碱基长度的双链RNA代替长双链RNA，可以抑制靶基因的表达，将其命名为短干扰RNA(shortinterferingRNA)(siRNA)(参见国际公开第01/75164号说明书)。

哺乳动物细胞中导入长双链RNA时，由于病毒防御机制引起细胞程序死亡，不能抑制特定的基因表达，但发现只要为20～29碱基的siRNA，则不会引起上述反应，可以抑制特定基因的表达。其中21～25个碱基的siRNA的表达抑制效果高[“自然(Nature)”，2001年，第411卷，第6836号，p.494-498，“遗传学自然评论(NatureReviewsGenetics)”，2002年，第3卷，第10号，p.737-747，“分子细胞(MolecularCell)”，(美国)，2002年，第10卷，第3号，p.549-561，“自然生物技术(NatureBiotechnology)”，(美国)，2002年，第20卷，第5号，p.497-500]。另外，已有报道指出，不仅是双链RNA，具有通过分子内杂交形成的发夹(hairpin)结构的单链RNA也与siRNA相同地显示为RNAi[参见“美国国家科学院院刊(ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica)”，2002年，第99卷，第9号，p.6047-6052]。

关于RNAi，在体内试验中也经常得到验证，已经报道了对胎儿动物使用50个碱基对以下的siRNA的效果(参见专利文献1)及对成体小鼠的效果(参见专利文献2)。另外，静脉内给与小鼠胎鼠siRNA时，可确认在肾脏、脾脏、肺、胰脏及肝脏各脏器内具有抑制特定基因表达的效果(参见非专利文献1)。并且，还报道了在脑细胞中直接给与siRNA，也能抑制特定基因的表达(参见非专利文献2)。

另一方面，作为向细胞内输送核酸的方法，已知有使用阳离子脂质体或阳离子聚合物的方法。但是，该方法中，静脉内给与含有核酸的阳离子脂质体或阳离子聚合物后，核酸被迅速地从血中除去，靶组织为肝脏或肺以外的组织时，例如为肿瘤部位等时，不能将核酸输送到靶组织，不能够充分地发挥作用。因此，已有报道指出一种包封核酸的脂质体(在脂质体内包封了核酸的脂质体)可以解决核酸在血中被迅速地除去的问题(参见专利文献3～6及非专利文献3)。作为包封核酸等的脂质体的制备方法，专利文献3中报道了如下方法，即，例如将阳离子性脂质预先溶解在氯仿中，然后加入寡脱氧核苷酸(ODN)的水溶液和甲醇，混合后，通过离心分离使阳离子性脂质/ODN的复合体移至氯仿层中，再取出氯仿层，向其中加入聚乙二醇化磷脂、中性的脂质和水，形成油包水型(W/O)乳剂，采用逆相蒸发法处理，制备ODN内包脂质体，专利文献4及非专利文献3中报道了如下方法，即，将ODN溶解于pH3.8的柠檬酸水溶液中，加入脂质(乙醇中)，使乙醇浓度降低至20v/v％，制备ODN内包脂质体，进行定型过滤，通过透析除去过量的乙醇后，再在pH7.5下透析试样，除去附着在脂质体表面的ODN，制备ODN内包脂质体。上述方法均可制备包封核酸等有效成分的脂质体。