[发明专利]一种可用于低海拔地区之全人工培育冬虫夏草的方法

说明书

技术领域

本发明属于药食用菌培育技术领域，涉及一种冬虫夏草的培育方法。

背景技术

冬虫夏草[Ophiocordyceps sinensis(Berk.)G.H.Sung et al.]别名虫草、冬虫草、夏草冬虫。是由冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis(Berk.)G.H.Sung et al.寄生在蝙蝠蛾科Hepialidae蝠蛾属Hepialus昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体。野生冬虫夏草分布在我国西藏、青海、云南、四川及甘肃等省区3000～5000m的高寒草甸区，且对生境要求极其特殊。在自然条件下，其生活史极其复杂，必须经过相对独立的分生孢子阶段和子囊孢子阶段的转变，其寄主蝙蝠蛾需要5～6年才能完成一个世代，其中85％以上的时间营地下生活，全年具有世代重叠现象。中医认为：冬虫夏草性温而味甘，药用价值极高，具有补肺、益肾、补精髓及诸虚百损、止咳化痰、抗白血病、抗抑郁症、调节免疫系统之功效。

面对环境的破坏、虫草产量减少，人类对虫草需求的增加等问题，人工培育冬虫夏草成了一种趋势，更是大家在科学界探索的目标。由于虫草培育过程中对环境要求很高，通常在高海拔地区进行培育，如何能在日常环境中，特别是低海拔地区培育出在成分、外观等与野生虫草一致的冬虫夏草，目前并没有相关技术报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种冬虫夏草的培育方法，以克服现有技术的不足。

为了实现上述目的，本发明冬虫夏草的培育方法，包括以下步骤：

(1)菌种准备：

挑选完整新鲜野生虫草，用无菌水冲洗过夜后，在洁净工作台剥开虫体部分，勾取里面菌丝培养，依生长情况，培养90-120天后，低温、光照的条件在培养基斜面上长出子实体，选择符合要求的子实体进行纯化扩培，经分子鉴定确定为菌种无误后进行生产发酵扩大；

(2)寄主工程：

1)在野外采集的第一代虫蝙蝠蛾蛹用滤纸保湿培养，羽化为成虫后，经形态鉴定其物种，成虫安排在羽化帐中，羽化帐底部铺腊纸，在蜡纸上放入树枝，以便成虫攀附产卵；产卵后将卵收集，将其放入培养箱中培养，其中采用常规滤纸保湿方法保持卵的湿度，培养温度为12-15℃，培养时间为28-40天；培养结束后用无菌水冲洗干净；

2)待卵孵化后模拟高山草甸环境饲养幼虫，养虫的基质层以草炭土、泥炭土、沙土、蛭石为主，含水量约35-40％；基质层用于模拟高山环境用腐殖土。用于养虫的外部环境为低温高湿环境，温度约为14℃，空间湿度约为50％，卵期和蛹期及成虫饲养空间湿度为90％；每个养虫盒饲养100条虫；

(3)世代循环：

按上述方式饲养后的第二年的3-6月翻开基质，可发现第二代蛹，按雌雄分开饲养，饲养基质层与在前的基质层相同，方便以后进行雌雄配比羽化交尾，养蛹湿度比养虫的湿度大，为60％，空间湿度每天用造雾器喷2次水雾，保持土壤和空间湿度，进行二代虫的饲养，依此方法可进行世代循环；

(4)侵染工程：

采用下述方法中的任意一种：

方法一：用第一步分离确定之菌种进行常规发酵培养，用得到菌丝用300目滤网过滤，将滤网上的菌丝倒在5％的葡萄糖溶液中，用打碎机捣碎，再用100目过滤网过滤，保留滤液作为侵染液，此时的侵染液中含有液体发酵的孢子和菌丝段，拌入养虫基质层第三层沙土层中，利用幼虫食入肠道或者接触表皮气孔达到侵染的目的；

方法二：利用人工培养冬虫夏草用针刺侵染装置进行针刺侵染，所述进行针刺侵染针筒的外侧壁上设有针头容纳盒，针筒的头部设有针头，针头上包裹硅胶垫，针头露出硅胶垫的长度为1.3-1.6mm，针头的直径为0.15-0.3mm；用发酵液颜色为棕黄色或者黄黑色的发酵菌丝经过300目滤网或者miracloth过滤、将滤网上的菌丝倒在5％的葡萄糖溶液中，用打碎机捣碎，再用两层纱布过滤，收集滤液用低温离心机在4℃下离心30分钟，离心机转速为10000转/分钟。离心后发现离心管底部为菌丝饼状或团状，最上面一层为几乎是纯水，用针头抽取菌丝饼或团之上、纯水层之下的中间层液体，作为针刺侵染液；采用手动的方法，针刺蝙蝠蛾幼虫，针刺时的深度把握，以硅胶垫的头部轻触为准；

(5)人工培养出草：