[发明专利]丝栗栲和米槠微卫星标记的特异性引物及检测方法

权利要求书

1.一种丝栗栲微卫星标记和米槠微卫星标记的特异性引物，其特征在于，所述的微卫星标记的特异性引物如下所示：

特异性引物Slk4-2：F：TCCTGTTCAAGGCCATCT，R：ATCCACATTTCGGACACC；

特异性引物Slk5-1：F：GGTAATCGGTTTAGGACA，R：5'-TATTCCGCTATCGCAGTC；

特异性引物Slk8-1：F：AGTTTGCTGCCTGCCACAT，R：5'-TTTGCCCACTTGCTCCCT；

特异性引物Slk9-1：F：AAATGCTTGGTGGGAGCG，R：GAGATTGGCACGATGGAC；

特异性引物Slk10-2：F：AGTCTCAGATAAAATCCCAATA，R：CTTTCCATCACCTTAGTCCA；

特异性引物Slk11-1：F：AGCAAACCAGCCAACAAG，R：GGGCCACAAATGATAACACTAA；

特异性引物Slk12-2：F：ACACTGACAGCCACCACT，R：CTCACGCAACCTTCTTCT；

特异性引物Slk13-1：F：GCCCGTCCCTTTCTTCTC，R：TGGGTGGATCACAGTTTT。

2.一种丝栗栲微卫星标记的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取丝栗栲基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的特异性引物中的每个引物对分别进行PCR扩增；

(3)利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对PCR扩增产物进行分型。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述的步骤(2)中的PCR扩增的体系为：10×buffer 1μl，25mmol/L MgCl₂ 0.6μl，10mmol/L dNTP 0.6μl，5U/μl DNA聚合酶0.1μl，DNA模板50-100ng，25mmol/L引物F和R各0.5μl，双蒸水定容至10μl。

4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述的步骤(2)中的PCR扩增，其扩增反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性40sec，各微卫星引物对退火温度下复性60sec，72℃延伸60sec，34个循环；最后70℃延伸5min，4℃保存；丝栗栲微卫星标记的特异性引物的退火温度分别为：Slk4-2：55℃；Slk5-1：54℃；Slk8-1：54℃；Slk9-1：57℃；Slk10-2：54℃；Slk11-1：55℃；Slk12-2：57℃；Slk13-1：56℃。

5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述的步骤(3)中的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳使用8％的凝胶浓度。

6.一种米槠微卫星标记的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取米槠基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的特异性引物中的每个引物对分别进行PCR扩增；

(3)利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对PCR扩增产物进行分型。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述的步骤(2)中的PCR扩增的体系为：10×buffer 1μl，25mmol/L MgCl₂ 0.6μl，10mmol/L dNTP 0.6μl，5U/μl DNA聚合酶0.1μl，DNA模板50-100ng，25mmol/L引物F和R各0.5μl，双蒸水定容至10μl。

8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述的步骤(2)中的PCR扩增，其扩增反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性40sec，各微卫星引物对退火温度下复性60sec，72℃延伸60sec，34个循环；最后70℃延伸5min，4℃保存；米槠微卫星标记的特异性引物的退火温度分别为：Slk4-2：55℃；Slk5-1：54℃；Slk8-1：54℃；Slk9-1：57℃；Slk10-2：54℃；Slk11-1：55℃；Slk12-2：57℃；Slk13-1：56℃。

9.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述的步骤(3)中的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳使用8％的凝胶浓度。