[发明专利]鉴定化妆品中驴、马及牛源性成分的引物、探针组合物、试剂盒及多重荧光PCR检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鉴定化妆品中驴、马及牛源性成分的引物、探针组合物、试剂盒及多重荧光PCR检测方法，属于分子生物学技术领域。

背景技术

近年来，国内外广大消费者对化妆品的产品质量和成效品种等都提出了更高的要求。尤其是传统的护肤、护发和清洁用的化妆品，在性能上已不能满足消费则的要求。化妆品的生产正朝着具有营养和疗效的方向发展。尤其以动物性成分及其提取物作为特殊成分应用于化妆品的研究颇为活跃，用途也在不断扩大。其中驴奶、马奶是理想的化妆品原料，驴奶、马奶的营养价值是科学界共识，《本草纲目》就曾对此有明确介绍。它们含有丰富的维生素和人体所需要的脂肪酸，还有抗衰老、抗氧化及有助细胞再生的有效成分。驴奶中富含丰富的“美白因子”，有明显的美白肌肤，保湿平皱的作用；此外，驴奶中含有足量的脂肪，如ω-3系列的脂肪酸和ω-6系列的脂肪酸，它们有助于维生素的吸收。因为这些丰富的营养价值，目前已被广泛应用到美容产品上。传说埃及艳后就是每天洗驴奶浴保持着皮肤白嫩润滑。马油，即马的脂肪，源自于中国古代的中医药方。马油有祛痘印、疤痕、祛斑以及细腻肌肤等功效，尤其是在冬天对手脚冻伤有特效。

鉴于驴奶、马奶较高的营养价值和药用价值，近年来驴奶、马奶制品的价格远高于普通牛奶制品，其市场需求量更是逐年上升，但由于内地人食肉和熬皮制胶等需要，驴存栏量却逐年降低，使得驴奶成为稀有物种资源。在市场利益的驱动下，一些没有驴奶资源的化妆品生产企业也纷纷推出了驴奶面膜、马油膏、驴奶面霜等产品，一时间市场上真假驴奶马奶难辨。有些企业在化妆品种中掺入牛奶，冒充驴奶，有些号称含驴奶成分的化妆品甚至没有添加任何驴、马源性成分严重侵害了消费者的利益。目前我国对化妆品行业动物源性检测环节技术薄弱，与国际水平还有一段明显的距离，我国化妆品行业想得到健康的发展，就迫切需要解决主要成分真伪鉴定问题，需要对大量的化妆品进行实时快速的动物源性测定，因此开发一种快速有效的检测试剂盒势在必行。

虽然目前国际国内对食品、饲料中动物源性检测方法报道很多，但多是形态学观察，不适用于化妆品中通过深加工的动物产品；免疫学检测方法(ELSIA)是一种基于可溶性抗原与抗体反应的简便方法，目前已开发研制了几种商业化的检测生肉及中度加工的食品中动物成分的检测试剂盒，但如果经过高温灭菌处理后的产品则不能检出；近红外线光谱检测方法(NIRS)在食品饲料中广泛地用于饲料的质量控制分析，如水分、蛋白、脂肪、灰分、糖、淀粉、纤维等的测定，该方法检测快捷，使用中没有有害物质，样品用量少，但该方法的最大缺点是非直接的，因此需要大量的具有权威性的标准品样品以形成标准或判别模式，即针对不同动物成分、不同组份所建立的光谱库，其结果不能单独作为法律依据。而以聚合酶链式反应(PCR)为基础的技术已逐步成为了食品中动物源性成分种属鉴定的核心方法。近年来实时荧光PCR技术的飞速发展大大提高了食品中物种鉴别的效率和灵敏度，尤其适合于各种深加工产品，并使得成分含量的定量溯源成为可能。目前对化妆品中驴、马及牛源性成分多重荧光PCR检测研究还尚未报道，因此，建立一种快速鉴定化妆品中驴、马及牛源性成分多重荧光PCR检测方法及检测试剂盒对化妆品的安全快速监管具有重要的创新性实践意义。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种快速鉴定化妆品中驴、马及牛源性成分的引物、探针组合物、试剂盒及多重荧光PCR检测方法。该发明的引物、探针组合物以及试剂盒特异性强，灵敏度高，检测结果准确可靠，并能有效指示假阴性出现；该发明的多重荧光PCR检测方法无须开盖、不易污染，灵敏准确，通量大，对化妆品的安全快速监管具有重要的创新性实践意义。

本发明是通过以下技术方案实现的：

鉴定化妆品中驴、马及牛源性成分的引物、探针组合物，包括以下引物和探针，其核苷酸序列如下：

(1)引物

通用引物：上游引物:5'AGACGAGAAGACCCTATGGAG3'；

下游引物:5'CTCCGAGGTCACCCCAA3'；

(2)探针：

驴特异探针(LP)：5’CACAAAAAATAATATACAAACCTAACCTCCAG3’；

马特异探针(MP)：5’CAACACACAAACCTAACCTTCAGGGA3’；

牛特异探针(NP)：5’CCAACCCAAAGAGAATAAATTTAACCATTA3’；

内标探针(16sP)：5'AAGTACGCTCCATTGGTGACCTCATTTC3'；