[发明专利]脂质灭菌方法

说明书

本发明涉及一种磷脂悬浮液的灭菌方法，可用于制备包括磷脂稳定化的全氟丁烷微泡的超声造影剂前体。该方法提供了无菌保证，未将磷脂过度热降解。该方法也适用于工业规模生产。还提供了制备结合本发明的灭菌方法的试剂盒和超声造影剂的方法。

技术领域

本发明涉及一种磷脂悬浮液的灭菌方法，可用于制备包括磷脂稳定化的全氟丁烷微泡的超声造影剂前体。该方法提供了无菌保证，未将磷脂过度热降解。该方法也适用于工业规模生产。还提供了制备结合本发明的灭菌方法的试剂盒和超声造影剂的方法。

发明背景

基于全氟化碳(例如全氟丙烷或全氟丁烷)的磷脂稳定化微泡的超声造影剂，在本领域中是公知的[参见例如Wheatley等J.Drug Del.Sci.Technol.,23(1),57-72(2013)]。

WO 97/11683公开了磷脂经历水解，并解决了对于在高压灭菌期间稳定这样的组合物的需求(第6页第1整段)。WO 97/11683教导了使用pH小于或等于9.5的稳定缓冲液，以试图阻止磷脂在高压灭菌过程中降解。

WO 97/29782教导了在冷冻干燥稳定剂的存在下，可以通过冻干全氟化碳微泡制备在室温下稳定的超声造影剂前体，所述冷冻干燥稳定剂选自：蔗糖、麦芽糖、海藻糖、棉子糖或水苏糖，优选蔗糖。WO 97/29782还教导了在热灭菌过程中可以减少用于稳定这种造影剂的磷脂酰丝氨酸磷脂的含量。

WO 99/08715公开了一种包含含气囊泡的水分散体的药物组合物的制备方法，其中膜包含两亲性成膜材料，所述方法包括：

(i)由包含两亲性成膜材料的混合物生成含气囊泡的分散液；

(ii)冻干含所述含气囊泡的分散液；

(iii)用无菌含水液体重构步骤(ii)的冻干产物，以产生含气囊泡的水分散体；和

(iv)处理步骤(i)或步骤(iii)的水分散体产物或步骤(ii)的冻干产物，以产生基本上无聚集无菌的含气囊泡的水分散体。

EP 1228770A1教导了一种制备包含气体微泡的冻干超声造影剂的方法，其中冻干前体小瓶在减压的顶部空间气体下密封。所述减压被认为有助于控制前体小瓶的重构后形成的水性微泡组合物的粒径。

Feshitan等人[J.Co11.Interf.Sci.，329，316-324(2009)]报道，与表面活性剂包覆的微泡相比，脂质包覆的微泡在离心之后是稳定的，且该脂质外壳是高粘性的，并且相对不透气。Feshitan等人报道了尺寸范围4-5微米的全氟丁烷微泡可以稳定至少2天，但在2周后就趋于碎裂成更小尺寸的微泡(1-2微米)。

对于掺有磷脂的试剂的超声冻干前体制备方法仍存在需要，其对产品的无菌性进行控制。这种磷脂的灭菌方法需要经得起工业规模生产的检验，并且以满足规范要求(例如美国药典和ICH指南)的均匀小瓶含量和安全特性产生前体产品。

发明内容

预期用于哺乳动物肠胃外给药的磷脂稳定化气体微泡超声造影剂需要以无菌形式制备。终端灭菌对于这种造影剂不是一种合适的技术，因此需要无菌形式的磷脂悬浮液以允许无菌生产。工业规模的造影剂生产要求必须将大的体积(多升)灭菌。

本发明人发现，氢化卵磷脂酰丝氨酸中磷脂的热降解可以在高压灭菌时发生。因此，磷脂是热敏的，并且可以在高温下长时间加热时降解。此外，如果在尝试灭菌过程中发生过多降解，所需的气体微泡的超声特性可受到损害。因而，在实现彻底灭菌而不使磷脂过度热降解中存在问题。

这一问题在多升规模上加重，因为更大的体积使得更难确保在整个体系中的均匀热分布——具有任何局部过热或长时间暴露将导致发生更高水平的磷脂降解的风险。