[发明专利]一种利用细胞分泌蛋白SERS光谱检测药物细胞毒性方法

权利要求书

1.一种利用细胞分泌蛋白SERS光谱检测药物细胞毒性方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

1）细胞分泌蛋白的富集

待体外培养细胞处于对数分裂期时，弃掉原有细胞培养液，用PBS缓冲液冲洗三次，加入含有抗癌药物但不含双抗和胎牛血清的不完全细胞培养液，培养1-72h，分别取不同培养时间的细胞培养液200~500μL与-20℃~0℃的400-1000μL无水乙醇混合于一离心管中，8000~12000 rpm离心5-10min，弃上清液；沉淀用95wt%的乙醇洗涤一次，10000rpm离心2-5 min，弃上清液，得到沉淀于离心管底部的细胞分泌蛋白，室温下干燥30-60min；然后加入10~20μL超纯水溶解干燥后的细胞分泌蛋白，得到细胞分泌蛋白液；

2）SERS光谱检测

将SERS光谱增强基底溶胶进行离心浓缩处理，取SERS光谱增强基底浓缩胶体10-40μL与步骤1）制得的细胞分泌蛋白液2-10 μL混合均匀后，在光滑平整的检测基底上点样，点样直径为5-8 mm，自然晾干后进行SERS光谱的测量；

3）细胞分泌蛋白SERS光谱预处理及特征峰选择

对步骤2）测量得到的细胞分泌蛋白SERS光谱进行强度归一化或面积归一化处理，从350-3500cm^-1波数范围选取1-3个变化最为显著谱峰作为细胞分泌蛋白SERS光谱特征峰；

4）建立SERS光谱特征峰-细胞存活率标准曲线

利用四唑盐比色法检测对应浓度抗癌药物作用下的细胞存活率变化，以步骤3）SERS光谱特征峰的相对强度为纵坐标，四唑盐比色法测得的细胞存活率为横坐标作图即得标准曲线；最后根据SERS光谱特征峰相对强度在标准曲线上直接查出相应浓度抗癌药物作用细胞后细胞的存活率变化。

2.根据权利要求1所述的利用细胞分泌蛋白SERS光谱检测药物细胞毒性的方法，其特征在于：步骤2）所述SERS光谱增强基底溶胶为银溶胶或金溶胶中的一种。

3.根据权利要求1所述的利用细胞分泌蛋白SERS光谱检测药物细胞毒性的方法，其特征在于：步骤2）所述的离心浓缩处理为：离心转速为8000-12000rpm，时间为8-15 min。

4.根据权利要求1所述的利用细胞分泌蛋白SERS光谱检测药物细胞毒性的方法，其特征在于：步骤2）所述的检测基底为99.99%铝片、石英基底、不锈钢基底、金箔、MgF₂、CaF₂、银箔中的一种。

5.根据权利要求1所述的利用细胞分泌蛋白SERS光谱检测药物细胞毒性的方法，其特征在于：步骤2）所述的SERS光谱的测量其条件为：激光功率为0.15 ~18 mW，激光激发波长为400~900 nm，取谱范围为350-3500 cm^-1。

6.根据权利要求1所述的利用细胞分泌蛋白SERS光谱检测药物细胞毒性的方法，其特征在于：步骤3）所述的细胞分泌蛋白SERS光谱特征峰为药物作用细胞前后同一细胞分泌蛋白SERS光谱峰的相对强度出现明显变化的SERS光谱峰。