[发明专利]一种基于核酸外切酶的microRNA多色检测探针及检测方法在审

申请号：	201510530744.9	申请日：	2015-08-26
公开（公告）号：	CN105112411A	公开（公告）日：	2015-12-02
发明（设计）人：	周翔;王少儒;张小娥	申请（专利权）人：	武汉顺可达生物科技有限公司;武汉大学
主分类号：	C12N15/11	分类号：	C12N15/11;C12Q1/68
代理公司：	武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222	代理人：	常海涛
地址：	430071 湖北省***	国省代码：	湖北;42
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摘要：
搜索关键词：	一种基于核酸外切酶 microrna 多色检测探针方法
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【权利要求书】：

1.一种基于核酸外切酶的microRNA多色检测探针，其特征在于：所述的检测探针为发卡结构的DNA，包含三个部分：茎末端区、loop环状区和5'、3'末端标记的荧光基团和相对应的淬灭基团；所述的loop环状区包含待测microRNA的互补序列以及在该互补序列5'和/或3'方向的长度为10个碱基以下的小段单链序列。

2.根据权利要求1所述的检测探针，其特征在于：所述的茎末端区的长度为8-10个碱基对。

3.根据权利要求1所述的检测探针，其特征在于：所述的小段单链序列的长度为4-7个碱基。

4.根据权利要求1所述的检测探针，其特征在于：所述的荧光基团包括FAM、Cy5、Tamra、TexasRed；所述的淬灭基团包括BHQ1和BHQ2。

5.根据权利要求1所述的检测探针，其特征在于：所述的检测探针为：

/荧光基团/-CCCAACCCA(N)_nTTACTAGTGGGTTGGG-/淬灭基团/，

其中，双下划线部分为茎末端区序列，(N)_n为loop环状区与待测microRNA互补的序列，单下划线部分为loop环状区的小段单链序列。

6.一种基于核酸外切酶同时多色检测多种microRNAs的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)根据待测microRNA设计权利要求1所述的检测探针，选取不同荧光基团和相对应的淬灭基团分别进行5'或3'末端标记；

(2)将包含待检microRNA、检测探针和核酸外切酶Ⅰ的体系进行孵育；

(3)通过荧光仪检测孵育后体系相应荧光基团的发射光谱，根据荧光信号的有无和强度来判断是否含有待测microRNA以及其浓度。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的体系为50μL，检测探针的浓度为100nM，核酸外切酶Ⅰ的用量为20U。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的孵育的条件为37℃孵育50min。