[发明专利]蛋白质固相烷基化试剂的制备及固相烷基化试剂和应用

权利要求书

1.一种蛋白质固相烷基化试剂的制备方法，其特征在于：以硅胶颗粒为载体，通过原子自由转移聚合反应(ATRP)在载体表面上引入甲基丙烯酸缩水甘油酯,然后通过共价键合方式依次修饰上树枝状亲水性化合物聚乙烯亚胺(PEI)和碘乙酸-N-琥珀酰胺酯，制备成固相烷基化试剂。

2.按照权利要求1所述蛋白质固相烷基化试剂的制备方法，其特征在于：

硅胶颗粒进行原子自由转移聚合反应之前，首先于硅胶颗粒上修饰ATRP引发剂，其反应过程为：硅胶颗粒、无水甲苯、卤代硅烷化试剂混合后，搅拌回流6-24小时，制备修饰ATRP引发剂的硅胶颗粒；

它们用量为：硅胶颗粒1-100g、无水甲苯10-600mL、卤代硅烷化试剂0.1-12mL。

3.按照权利要求2所述的卤代硅烷化试剂的制备方法，其特征在于：卤代硅烷化试剂为溴代硅烷化试剂和/或氯代硅烷化试剂。

4.按照权利要求1所述的固相烷基化试剂的制备的方法，其特征在于：

通过原子自由转移聚合反应(ATRP)在载体表面上引入甲基丙烯酸缩水甘油酯的反应过程为：修饰ATRP引发剂的硅胶颗粒，甲醇、甲基丙烯酸缩水甘油酯、ATRP催化剂及配体试剂混合后，除气，回流反应2-24小时制得含环氧基团的硅胶颗粒Si-GMA；

它们用量为：修饰ATRP引发剂的硅胶0.5-10g、甲基丙烯酸缩水甘油酯1-25mL、甲醇10-300mL，ATRP催化剂5-100mg、配体试剂0.01-0.3mL。

5.按照权利要求4所述的固相烷基化试剂的制备方法，其特征在于：ATRP催化剂为卤化亚铜、卤化亚铁或卤化亚钌中的一种或二种以上。

6.按照权利要求4所述的固相烷基化试剂的制备方法，其特征在于：配体试剂为2,2’联二吡啶(bpy)、N,N,N’,N”,N”’-五甲基二亚乙基三胺、2-吡啶甲醛缩正丙胺或六甲基三乙基三胺中的一种或二种以上。

7.按照权利要求1所述的固相烷基化试剂的制备方法，其特征在于：

所述的然后通过共价键合方式依次修饰上树枝状亲水性化合物聚乙烯亚胺(PEI)和碘乙酸-N-琥珀酰胺酯的反应过程为：

含环氧基团的硅胶颗粒Si-GMA表面引入亲水活性反应基团，具体步骤如下：

A.将Si-GMA分散于磷酸缓冲溶液中,加入PEI，搅拌反应4-12小时；

其中采用PEI的最终浓度范围为1-100mg/mL；Si-GMA于磷酸缓冲溶液中的量为：Si-GMA0.5-10g于磷酸缓冲溶液1-100mL中；

B.将碘乙酸-N-琥珀酰胺酯溶于甲醇和磷酸缓冲溶液混合体系中，加入修饰PEI的硅胶颗粒，室温避光反应6-12小时；

其中碘乙酸-N-琥珀酰胺酯加入量为硅胶加入质量的1-1.5倍，溶剂体系中甲醇与磷酸缓冲溶液体积比为1/1-3/1。

8.按照权利要求7所述的制备方法，其特征在于：

磷酸缓冲溶液浓度为0.01-0.1M,pH值为7-9。

9.一种权利要求1-8任一项所述制备方法获得的蛋白质固相烷基化试剂。

10.一种权利要求9所述的蛋白质固相烷基化试剂的应用，其特征在于：其应用于细胞、组织、体液或毛发中一种或二种以上提取蛋白质中巯基的选择性反应或预处理。