[发明专利]一种用于检测K-ras基因突变的引物、探针及检测方法在审
| 申请号： | 201510534767.7 | 申请日： | 2015-08-25 |
| 公开（公告）号： | CN105441535A | 公开（公告）日： | 2016-03-30 |
| 发明（设计）人： | 宋冬梅;刘代新;何胜祥;李昂 | 申请（专利权）人： | 安徽同科生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 安徽信拓律师事务所 34117 | 代理人： | 娄尔玉 |
| 地址： | 237300 安徽省六安*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 ras 基因突变 引物 探针 方法 | ||
1.一种用于检测K-ras基因突变的引物、探针，其特征在于：其引物探针序列如下：
(1)12GGT>GAT置换突变的引物探针信息：
上游引物F：5’-GGCCAGAGGCTCAGCGGCTCCCAGG-3’
下游引物R：5’-TCCCTCATTGCACTGTACTCCTCTTG-3’
探针P1：5’-FAM-ACTAGTTGGAGCTGATC-BHQ-3’
(2)12GGT>AGT置换突变的引物探针信息：
上游引物F：5’-GGCCAGAGGCTCAGCGGCTCCCAGG-3’
下游引物R：5’-TCCCTCATTGCACTGTACTCCTCTTG-3’
探针P2：5’-HEX-ACTAGTTGGAGCTGATGC-BHQ-3’
(3)12GGT>GTT置换突变的引物探针信息：
上游引物F：5’-GGCCAGAGGCTCAGCGGCTCCCAGG-3’
下游引物R：5’-TCCCTCATTGCACTGTACTCCTCTTG-3’
探针P3：5’-ROX-ACTAGTTGGAGCTGGTTC-BHQ-3’
(4)12GGT>GCT置换突变的引物探针信息：
上游引物F：5’-GGCCAGAGGCTCAGCGGCTCCCAGG-3’
下游引物R：5’-TCCCTCATTGCACTGTACTCCTCTTG-3’
探针P4：5’-FAM-ACTAGTTGGAGCTGGCTC-BHQ-3’
(5)12GGT>TGT置换突变的引物探针信息：
上游引物F：5’-GGCCAGAGGCTCAGCGGCTCCCAGG-3’
下游引物R：5’-TCCCTCATTGCACTGTACTCCTCTTG-3’
探针P5：5’-HEX-ACTAGTTGGAGCTGTGTC-BHQ-3’
(6)12GGT>CGT置换突变的引物探针信息：
上游引物F：5’-GGCCAGAGGCTCAGCGGCTCCCAGG-3’
下游引物R：5’-TCCCTCATTGCACTGTACTCCTCTTG-3’
探针P6：5’-ROX-ACTAGTTGGAGCTGCGTC-BHQ-3’
(7)野生型的引物探针信息：
上游引物F：5’-GGCCAGAGGCTCAGCGGCTCCCAGG-3’
下游引物R：5’-TCCCTCATTGCACTGTACTCCTCTTG-3’
探针P7：5’-CY5-ACTAGTTGGAGCTGGGTC-BHQ-3’。
2.根据权利要求1中所述的一种用于检测K-ras基因突变的引物、探针，其特征在于：利用权利要求1中所述的引物、探针检测K-ras基因突变的检测方法：采用AMRS-PCR法检测K-ras基因突变情况：利用设计的特异性引物探针配置PCR反应液，加入人血液样本中提取的DNA，通过荧光实时定量PCR仪检测K-ras基因12密码子2155位GGT碱基突变为GAT、AGT、GTT、GCT、TGT、CGT。
3.根据权利要求2中所述的一种用于检测K-ras基因突变的引物、探针，其特征在于：鉴定K-ras密码子12突变情况方法，它是使用上述引物、探针鉴定K-ras密码子12突变情况，包括如下步骤：
(1)引物探针的设计；
(2)配置ARMS-PCR反应体系；
(3)肿瘤患者血液样本基因组DNA抽提；
(4)利用步骤(1)特异引物对突变靶序列进行PCR扩增放大，利用探针对扩增产物进行检测；
(5)结果分析。
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