[发明专利]一种NT-proBNP荧光免疫试剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种NT-proBNP荧光免疫试剂及其制备方法，属于医学检验测定技术领域。

本专利文件中所涉及之术语含义：

0.9％NaCl：表示配置完成后的溶液中每100ml含NaCl0.9g。

类似格式均表示类似含义，本文另有说明的除外。

背景技术

心力衰竭是各种心血管疾病的终末阶段，具有较高的死亡率，相当于一些恶性肿瘤，研究显示心力衰竭的死亡率为43％，5年死亡率达90％，重度心力衰竭的死亡率更高。脑利钠肽(BNP)由于心室受到牵拉刺激或者张力升高而分泌，能够早期反映整体甚至局部心脏结构改变导致的功能变化。BNP来自心室肌细胞，最初合成的为前脑利钠肽原(pre-proBNP)，是由134个氨基酸组成的多肽链。pre-proBNP在心肌细胞中裂解为脑利钠肽原(proBNP，108个氨基酸)和信号肽(26个氨基酸)。proBNP进入血液后裂解为具有生理活性的BNP和氨基端-脑利钠肽原(NT-proBNP)，理论上两者是1∶1的关系。

相对于BNP，NT-proBNP具有更长的血浆半衰期(60-120分钟)，BNP的血浆半衰期只有20分钟。NT-proBNP在血液中的分泌和存在具有累积作用，实际存在比BNP的浓度更高，更容易被检测到，即检测的敏感性提高，NT-proBNP更容易反映早期或者轻微心脏功能的变化。NT-proBNP具有更低的个体差异，不受个体生理性节律的影响。体外存放稳定性好，室温下可达3天，对标本运送、保存等非常重要。

NT-proBNP与临床心衰的严重程度成比例，心衰越严重，NT-proBNP就越高；而且NT-proBNP能够区分轻度心衰和心功能正常者。鉴于NT-proBNP优于BNP对心力衰竭的诊断特点，2000年左右，国际上已经认定是NT-proBNP测定心衰的一个划时代的具有特异性的标志物。

目前国内外已有商品化的NT-proBNP试剂盒，如美国罗氏生产的NT-proBNP免疫检测试剂盒通过了美国FDA得认证，用于对充血性心衰的辅助诊断，使用了电化学发光的方法，灵敏度和精密度，准确度都很好，但是试剂价格昂贵。国外另有一些公司生产的NT-proBNP试剂盒利用酶联免疫技术开发。国内一些公司的N端脑钠肽原检测试剂采用了胶体金的技术等，存在诸多缺点，如酶联免疫试剂不稳定，血清实验中的干扰严重，样品垫对红细胞的拦截效果差，分辨率低，胶体金为定性检测或半定量检测等等。随着医学诊断技术向微量，高灵敏度，高特异性方向发展，酶联免疫，胶体金等技术已经出现不适应倾向。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的上述问题，提出了一种可降低血清实验中的干扰，使样品垫对红细胞的拦截效果好的NT-proBNP荧光免疫试剂。

本发明的目的可通过下列技术方案来实现：一种NT-proBNP荧光免疫试剂，所述NT-proBNP荧光免疫试剂包括标记用NT-proBNP1抗体、标记用羊抗鸡IgY抗体、包被用NT-proBNP2抗体、包被用鸡IgY抗体、粒子重悬液、样品垫处理液，其中各组分：

标记用NT-proBNP1抗体：100-300μg/1mg荧光粒子；

标记用羊抗鸡IgY抗体：100-300μg/1mg荧光粒子；

NC膜上划线的包被用NT-proBNP2抗体：2-3mg/ml，划线量：1μl/cm；

NC膜上划线的包被用鸡IgY抗体：2-3mg/ml，划线量：1μl/cm；

粒子重悬液：含100-200mMTris的Tris-HCl重悬液，pH8-9；

样品垫处理液：10mMPBS，pH7-8。

在上述NT-proBNP荧光免疫试剂中，所述的Tris-HCl重悬液还含250-500μg/ml鼠IgG，1-5％小牛血清，0.1-0.5％PluronicF68，0.5-1％酪蛋白，0.9％NaCl，0.05％NaN₃。

作为优选，所述的鼠IgG、小牛血清在加入粒子重悬液前均先在55-60℃下处理10min。

在上述NT-proBNP荧光免疫试剂中，所述的PBS还含0.1mg/ml-0.5mg/ml植物凝集素。