[发明专利]用于产生脱唾液酸化免疫球蛋白的方法和载体

说明书

本申请是申请日为2007年12月26日，申请号为200780051802.3(国际申请号为PCT/US2007/088809)，发明名称为“用于产生脱唾液酸化免疫球蛋白的方法和载体”的发明专利申请的分案申请。

发明背景

发明领域

本发明涉及产生与Fc受体相互作用的治疗蛋白质例如抗体的方法，其中寡糖链的组成就抗体与其靶的抗体亲抗原性以及Fc受体结合亲和力进行最优化，从而与产生糖基化抗体的非最优化方法相比较，最优化所述抗体的效应子功能活性。

相关技术的描述

抗体是在先天免疫中发挥显著作用的可溶性血清糖蛋白。在重链恒定区中的保守位置处所有天然产生的抗体的碳水化合物结构都随同种型而变化。每种同种型都具有N联寡糖结构的不同阵列，这反复不定地地影响蛋白质装配、分泌或功能活性(Wright，A.和Morrison，S.L.，TrendsBiotech.15：26-32(1997))。参考图1和2，依赖于加工程度，附着的N联寡糖结构相当不同，并且可以包括高甘露糖，以及含或不含二等分GlcNAc和核心岩藻糖残基的复杂双触角寡糖(Wright，A.和Morrison，S.L.，同上)。一般地，存在在特定糖基化位点处附着的核心寡糖结构的异质加工，从而使得甚至单克隆抗体也作为多重糖形存在。类似地，已显示抗体糖基化中的主要差异在抗体产生细胞系之间发生，并且甚至对于在不同培养条件下生长的给定细胞系可见微小差异。

在聚糖上的唾液酸(静止基团)已知在延长除抗体外的糖蛋白的血清半衰期中是重要的(Stockert，R.J.(1995)Physiol.Rev.75，591-609)。迄今为止，唾液酸对单克隆抗体(Mabs)的作用仍未完全了解。Mabs的血清半衰期特别长寿，并且Fc-融合蛋白的构建已证明是在开发治疗蛋白质例如蛋白质enteracept中有用的策略。

抗体和T细胞受体分子具有负责特异性细胞表面受体结合的区域，所述结合调节细胞应答。在免疫系统中，这些功能分类为体液和细胞的。抗体通常称为连接体液和细胞免疫机制的衔接分子：体液应答主要归因于能够与靶抗原高亲和力结合的成熟的、分泌的、循环抗体。细胞应答归因于通过ab-ag复合物的结合和通过下游结局的细胞激活结果，所述下游结局通过由于ab-ag复合物与效应细胞结合释放的细胞介质引起。这些细胞应答包括靶的中和、调理作用和致敏作用(如果抗原展示于细胞表面上)、肥大细胞的致敏作用和补体激活。对于细胞靶，即，细胞表面抗原，这些效应子功能导致通常所谓的抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)和依赖补体的细胞毒性(CDC)。

在抗体同种型(例如，IgE、IgD、IgA、IgM和IgG)中，IgGs是最丰富的，其中IgG1亚类显示出最显著程度和大量的效应子功能。IgG1类型的抗体是癌症免疫治疗中最常用的抗体，在所述癌症免疫治疗中ADCC和CDC活性通常视为重要的。在结构上，IgG铰链区和CH2结构域在抗体效应子功能中起重要作用。Fc区(由铰链、CH2和CH3结构域的二聚化形成)中存在的N联寡糖影响效应子功能。共价结合的寡糖是复杂双触角类型结构，并且是高度异质的(参见图1和2)。在Asn297处的保守N联糖基化位点位于每个CH2结构域中。在成熟抗体中，与Asn297附着的2个复杂双触角寡糖包埋在CH2结构域之间，与多肽主链形成广泛接触。已发现它们的存在对于抗体介导效应子功能例如ADCC是必需的(Lifely，M.R.，等人，Glycobiology5：813-822(1995)；Jefferis，R.，等人，ImmunolRev.163：59-76(1998)；Wright，A.和Morrison，S.L.，同上)。

由各种宿主细胞产生的装饰Fc部分抗体或抗体衍生结构包含的异质寡糖占优势地包含唾液酸、岩藻糖、半乳糖和GlcNAc残基作为末端糖(Raju，T.S.，等人Glycobiology2000.10(5)：477-86)。已显示这些末端糖中的一些，特别是暴露的半乳糖、核心岩藻糖和二等分GlcNAc残基，影响分子的Fc部分的结构且由此改变抗体效应子功能。效应子功能例如ADCC活性和CDC活性可以通过附加聚糖的组成加以改变，所述效应子功能依赖于与称为Fc受体的细胞表面受体的结合，以及与各种配体包括C1q补体蛋白质的结合(PrestaL.2003.CurrOpinStructBiol.13(4)：519-25)。在Fc处附着的大多数N联聚糖未唾液酸化至显著程度(IdusogieEE，等人2000.JImmunol.15：164(8)：4178-84)。