[发明专利]一种聚乙二醇修饰蛋白的纯化工艺在审
| 申请号： | 201510536560.3 | 申请日： | 2015-08-27 |
| 公开（公告）号： | CN106632588A | 公开（公告）日： | 2017-05-10 |
| 发明（设计）人： | 马永;王俊 | 申请（专利权）人： | 江苏众红生物工程创药研究院有限公司;常州京森生物医药研究所有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/36 | 分类号： | C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C12N9/82;C12N9/64 |
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| 地址： | 213125 江苏省常州市新*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 聚乙二醇 修饰 蛋白 纯化 工艺 | ||
1.一种PEG修饰蛋白的纯化工艺，包括采用离子交换层析法的纯化的步骤，其特征在于，在所述纯化步骤之前，还包括去除PEG修饰蛋白修饰反应混合物中的游离PEG及PEG水解产物的步骤。
2.根据权利要求1所述的纯化工艺，其特征在于，所述PEG水解产物为酯类化合物。
3.根据权利要求1或2所述的纯化工艺，其特征在于，所述去除游离PEG及PEG水解产物的步骤采用膜过滤法去除。
4.根据权利要求3所述的纯化工艺，其特征在于，所述膜过滤法为超滤膜过滤法。
5.根据权利要求1所述的纯化工艺，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，以超滤膜过滤法去除PEG修饰蛋白后的修饰反应混合物中残留的游离PEG及PEG水解产物；
步骤二，以离子交换层析法进一步纯化得到目的PEG修饰蛋白。
6.根据权利要求5所述的纯化工艺，其特征在于，包括以下步骤：
第一步：超滤膜过滤法去除游离PEG及PEG水解产物
向PEG修饰蛋白后的修饰反应混合物中加入2-20倍体积的平衡缓冲液进行稀释，用超滤系统进行超滤浓缩；
第二步：离子交换层析法进一步纯化，具体工艺条件如下：
色谱法条件：阴离子交换柱；平衡缓冲液：10-200mM的Tris-Hcl(pH8.0-9.0)；或10-200mM的磷酸缓冲液(pH7.0-8.0)；洗脱缓冲液：含0.5-1M NaCl的10-200mM的Tris-HCl(pH8.0-9.0)或含0.5-1M NaCl的10-200mM的磷酸缓冲液(pH7.0-8.0)，流速1-5mL/min，检测波长为280nm；
上样：将第一步超滤浓缩后的PEG修饰蛋白样品直接上样，流速为1-5mL/min；
平衡：平衡缓冲液冲洗1-5个柱体积；
收集：洗脱缓冲液梯度洗脱，并收集洗脱峰样品，得到PEG修饰蛋白。
7.根据权利要求6所述的纯化工艺，其特征在于，所述PEG修饰蛋白为PEG修饰的门冬酰胺酶或激肽释放酶。
8.根据权利要求7所述的纯化工艺，其特征在于，所述PEG修饰蛋白为PEG随机修饰门冬酰胺酶。
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