[发明专利]一种用于血型抗体检测的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于血型抗体鉴定和/或检测的试剂盒，其特征在于，包括：固定有血型抗原的固相载体、补体、酶标记的抗补体、显色液，

所述的试剂盒中补体为C1q，所述的补体C1q的浓度为0.1-0.4μg/mL，

所述的酶标记抗补体为辣根过氧化物酶标记的抗补体C1q，且所述的辣根过氧化物酶标记的抗补体C1q浓度为0.625-2.5μg/mL，

所述的固定有血型抗原的固相载体的制备方法包括：将固相载体的表面氨基化；用⁶⁰Co辐照固相载体或用紫外线照射固相载体；将血型抗原或含血型抗原的红细胞膜蛋白提取物用碳酸盐缓冲液稀释，以50-500μL包被固相载体，放置1-36h后去除液体，加入含5-20％牛血清白蛋白BSA的磷酸盐缓冲液，在室温下封闭1-8h，甩去液体，干燥即得，

所述的血型抗原或含血型抗原的红细胞膜蛋白提取物用碳酸盐缓冲液稀释至浓度为0.4mg/mL，

所述的固相载体为微量滴定板或条与条之间可拆卸的微孔板，

所述的固相载体的材质为聚苯乙烯或聚氯乙烯，

所述的固相载体的表面氨基化包括加入100-200μL的浓度为0.05-0.2g/L的多聚赖氨酸，水浴2-4h，除去液体后以蒸馏水洗涤。

2.权利要求1所述的一种用于血型抗体鉴定和/或检测的试剂盒，其特征在于，所述的含血型抗原的红细胞膜蛋白提取物的制备方法包括：取含有血型抗原的外周血，离心后去上清，取压积红细胞，加入细胞裂解液，放置后离心去上清，向沉淀物加入水并振荡混匀，再次离心去上清，重复向沉淀物加入水并振荡混匀，离心去上清步骤2-8次，所得到的沉淀物即为含血型抗原的红细胞膜蛋白提取物。

3.权利要求1所述的一种用于血型抗体鉴定和/或检测的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括阴性对照品、阳性对照品、洗涤液、反应终止液或样品稀释液中的一种或两种以上的组合。

4.一种血型抗体的鉴定和/或检测方法，其特征在于，包括：

将待测血清或待测血浆加入固定有血型抗原的固相载体中；加入补体C1q，孵育10-300min，用洗涤液洗涤；加入酶标记的抗补体C1q，孵育10-300min，用洗涤液洗涤；加入显色液，滴入终止液，测定吸光度，

所述的补体C1q加入量为10-100μL，所述的补体C1q的浓度为0.1-0.4μg/mL，

所述的酶标记的抗补体C1q加入量为10-100μL，所述的酶标记的抗补体C1q浓度为0.625-2.5μg/mL，

所述的固定有血型抗原的固相载体的制备方法包括：将固相载体的表面氨基化；用⁶⁰Co辐照固相载体或用紫外线照射固相载体；将血型抗原或含血型抗原的红细胞膜蛋白提取物用碳酸盐缓冲液稀释，以50-500μL包被固相载体，放置1-36h后去除液体，加入含5-20％牛血清白蛋白BSA的磷酸盐缓冲液，在室温下封闭1-8h，甩去液体，干燥即得，

所述的血型抗原或含血型抗原的红细胞膜蛋白提取物用碳酸盐缓冲液稀释至浓度为0.4mg/mL，

所述的固相载体为微量滴定板或条与条之间可拆卸的微孔板，

所述的固相载体的材质为聚苯乙烯或聚氯乙烯，

所述的固相载体的表面氨基化包括加入100-200μL的浓度为0.05-0.2g/L的多聚赖氨酸，水浴2-4h，除去液体后以蒸馏水洗涤。

5.权利要求4所述的一种血型抗体的鉴定和/或检测方法，其特征在于，所述的待测血清或待测血浆的加入量为10-100μL。