[发明专利]一种稳定的糖化白蛋白校准品和质控品的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种稳定的糖化白蛋白校准品和质控品的制备方法，属于医学检测技术领域。

背景技术

糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。糖尿病时长期存在的高血糖会导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍，其发病晚期带来的并发症具有致死性，已经成为继肿瘤、心血管病变之后第三大严重威胁人类健康的慢性疾病，严重威胁着人类健康。

糖化白蛋白是反映过去2-3周平均血糖水平的一项指标。比血糖检测“金标准”糖化血红蛋白的反映周期要短一些。因此，糖化白蛋白在治疗效果的确认以及临床用药量的调整方面比糖化血红蛋白具有优势。另外，在许多血红蛋白代谢异常的情况下，糖化血红蛋白的结果受到影响不能真实反映患者的血糖水平，而糖化白蛋白的结果则不受影响，如糖尿病肾病透析患者、贫血患者、妊娠期妇女的血糖检测等等，因此糖化白蛋白为血糖监测首选指标。

但是，传统的糖化白蛋白校准品和质控品均采用血清制成，存在被HIV或HPV等污染的风险，血清中共存的葡萄糖还会与白蛋白不断反应生成糖化白蛋白，使糖化白蛋白的浓度产生波动。因此，中国发明专利(公开号：CN103076213A)公开了一种糖化白蛋白质控品的制备方法，该制备方法包括以下制备步骤：1)先在反应液中加入白蛋白，使每分升反应液中白蛋白含量为1-10克，在15-45℃下糖基化反应1-10天后，离心除去沉淀，留取上清夜，其中所述反应液成分为：缓冲液：20-200mM，pH7.5-8.5，氯化钠：9g/L，葡萄糖：50-200mM，金属螯合剂：0.1-10mM，防腐剂质量百分含量：0.1-5％，其中上述溶剂为水；2)将步骤1)中制备的上清液装入透析袋，置于4℃透析液中透析至完全除去葡萄糖，离心取上清液，其中所述透析液成分为：缓冲液：20-200mM，pH7.5-8.5，氯化钠：9g/L，金属螯合剂：0.1-10mM，防腐剂质量百分含量：0.1-5％，其中上述溶剂为水；3)将步骤2)中制备的上清液用白蛋白稀释液稀释至所需质控品浓度，加入赋形剂，然后进行低温预冻、冷冻干燥，制成冻干粉，最后将冻干粉复溶、分装即可使用。该专利采用了重组人白蛋白为原料制成，避免了采用血清为原料制备时存在的缺陷。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的上述问题，提出了一种采用血清为原料制备稳定的糖化白蛋白标准品和质控品的制备方法。

本发明的目的可通过下列技术方案来实现：一种稳定的糖化白蛋白校准品和质控品的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

S1、选取血清去除沉淀和干扰物；

S2、向步骤S1处理后的血清中加入葡萄糖和防腐剂，放置于35-38℃的恒温水浴中糖化，依据糖化时间分别制得糖化白蛋白校准品和质控品；随着糖化进行，先得到质控低值的质控品，再得到校准品，最后得到质控高值的质控品；

S3、将上述制得的糖化白蛋白校准品和质控品分装置于2-6℃的透析液中，透析去除多余的葡萄糖，直至剩余葡萄糖含量小于0.1g/L为止；

S4、在上述透析处理后的糖化白蛋白校准品和质控品中加入防腐剂和10-50g/L冻干保护剂，冷冻干燥，制成冻干粉，再复溶，用糖化白蛋白检测试剂盒检测定值即可。

本发明以血清为原料，通过上述制备方法制备得到了稳定的糖化白蛋白标准品和质控品。避免了传统的糖化白蛋白校准品和质控品采用血清制成时，存在被HIV或HPV等污染的风险。同时，由于透析至葡萄糖只有小于0.1g/L，所以可以避免进一步生成糖化白蛋白，使糖化白蛋白的浓度产生波动的缺陷。而且，本发明制备工艺简单，不需要加入表面活性剂、赋形剂、酸碱调节剂等，生产成本低，长期稳定性好。

在上述的一种稳定的糖化白蛋白校准品和质控品的制备方法中，步骤S1中血清的HIV，HCV和HTLV均为阴性。

在上述的一种稳定的糖化白蛋白校准品和质控品的制备方法中，步骤S1中的干扰物通过透析液透析去除，透析液和步骤S3中的透析液的成分均为：缓冲液：20-100mM，氯化钠：8-10g/L，溶剂为蒸馏水。

在上述的一种稳定的糖化白蛋白校准品和质控品的制备方法中，缓冲液的pH为7-8。

在上述的一种稳定的糖化白蛋白校准品和质控品的制备方法中，缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液中的一种。

在上述的一种稳定的糖化白蛋白校准品和质控品的制备方法中，步骤S2中葡萄糖的用量为3-8g/L。