[发明专利]联合鉴定小麦对Bipolaris Sorokiniana黑胚病与叶枯病抗性的方法

权利要求书

1.一种联合鉴定小麦对小麦根腐平脐蠕孢Bipolaris sorokiniana黑胚病与叶枯病抗性的方法，其特征在于，所述联合鉴定方法包括以下步骤：

a、小麦根腐平脐蠕孢Bipolaris sorokiniana的保存：将实验室分离的小麦根腐平脐蠕孢Bipolaris sorokiniana单孢菌株置于马铃薯葡萄糖琼脂PDA试管斜面培养基上，于4℃冰箱保存备用；

b、小麦根腐平脐蠕孢Bipolaris sorokiniana的孢子悬浮液的制备：将步骤a中4℃冰箱保存的小麦根腐平脐蠕孢Bipolaris sorokiniana切成0.3cm²的块状，接种于马铃薯葡萄糖琼脂PDA培养基上，在25℃条件下暗培养，培养后用载玻片从培养好的菌落上将孢子刮下，采用蒸馏水冲洗、纱布过滤，得到孢子悬浮液，用血球计数板检测孢子悬浮液的浓度，调整至孢子浓度为3×10⁵个/mL，配置得到的孢子悬浮液放在溶液瓶中于4℃冰箱保存备用；

c、喷洒接菌、套袋保湿：小麦抽穗后，采用硫酸纸袋将小麦穗部及旗叶套袋；在小麦开花后第6天，将步骤b制备的Bipolaris sorokiniana孢子悬浮液中加入吐温-20摇匀，吐温-20的加入量占Bipolaris sorokiniana孢子悬浮液体积的0.02％，然后均匀喷洒在小麦穗部及旗叶，喷洒后采用塑料袋将小麦穗部及旗叶罩住保湿，保湿7天后换套硫酸纸袋；

d、鉴定结果记录：接菌后第15～18天记录叶片病斑面积占总叶片面积的百分比即为病斑面积百分率，作为小麦叶枯病抗性的评价指标；小麦收获后晾晒干，手工脱粒，统计黑胚籽粒占籽粒总数的百分比即为黑胚率，作为小麦黑胚病抗性的评价指标；

e、抗病性评价：根据步骤d记录所得病斑面积百分率和黑胚率来同时评价小麦对小麦根腐平脐蠕孢Bipolaris sorokiniana黑胚病与叶枯病的抗性。

2.根据权利要求1所述的联合鉴定小麦对小麦根腐平脐蠕孢Bipolaris sorokiniana黑胚病与叶枯病抗性的方法，其特征在于，马铃薯葡萄糖琼脂PDA的配制方法：

首先准备好原料马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂粉20g和自来水1000mL，自然pH；将马铃薯洗净去皮切成小块，水沸后放入煮10～15分钟，然后用四层纱布过滤、除掉土豆块，加入准备的葡萄糖和琼脂粉，继续加热搅拌混匀，冷却后再补足水分至1000mL；分装至15×150mm试管与250mL三角瓶中，121℃灭菌20分钟后取出；试管摆斜面，冷却后用于Bipolarissorokiniana的保存；三角瓶中的培养基倒入9cm培养皿中，冷却后用于培养Bipolarissorokiniana。

3.根据权利要求1所述的联合鉴定小麦对小麦根腐平脐蠕孢Bipolaris sorokiniana黑胚病与叶枯病抗性的方法，其特征在于：步骤b中Bipolaris sorokiniana在25℃条件下暗培养9～12天，培养后菌丝基本布满培养皿，颜色深黑，产生大量孢子时取出培养皿，用灭菌载玻片将孢子轻轻刮下，用蒸馏水冲洗培养皿2～3次，并用四层纱布过滤得到B.sorokiniana孢子悬浮液。

4.根据权利要求1所述的联合鉴定小麦对小麦根腐平脐蠕孢Bipolaris sorokiniana黑胚病与叶枯病抗性的方法，其特征在于：步骤e中所述根据步骤d记录所得病斑面积百分率和黑胚率来同时评价小麦对小麦根腐平脐蠕孢Bipolaris sorokiniana黑胚病与叶枯病的抗性，其具体鉴定方法为：

采用6级分类法评价小麦品种对叶枯病抗性：0级无病斑，属于高抗，计为HR；1级的病斑面积为0.1～1.9％，属于抗，计为R；2级的病斑面积为2.0～9.9％，属于中抗，计为MR；3级的病斑面积为10.0～49.9％，属于中感，计为MS；4级的病斑面积＞50.0％属于感，计为S；5级全叶干死，属于高感，计为HS；

评价黑胚病抗性的方法：无病粒，属于免疫，计为M；黑胚率为0.1～1.9％，属于高抗，计为HR；黑胚率为2.0～4.9％，属于抗，计为R；黑胚率为5.0～14.9％，属于轻感，计为hS；黑胚率为15.0～30.0％，属于感，计为S；黑胚率＞30％，属于高感，计为HS。