[发明专利]用于为核酸扩增作对照的寡核苷酸

权利要求书

1.一种由SEQ ID NO 1组成的分离的寡核苷酸。

2.一种组合物，其包括由SEQ ID NO 1、2和3组成的寡核苷酸。

3.一种用于为多个目标核酸的检测作对照的试剂盒，所述试剂盒包含由SEQ ID NO 1组成的检测探针，由SEQ ID NO 2组成和SEQ ID NO 3组成的扩增引物对，以及包含SEQ ID NO 4的对照核酸。

4.由SEQ ID NO 1组成的探针用于检测包含SEQ ID NO 4的对照核酸的用途。

5.一种用于在有内部对照的情况下分离并同时扩增第一和第二目标核酸的方法，所述第一和第二目标核酸能存在于一个或多个流体样品中，所述方法包括下列自动化步骤：

a.将包含SEQ ID NO 4序列的内部对照核酸加入到每个所述流体样品，

b.在一定的条件下在一个或多个容器中将固体支持材料和所述一个或多个流体样品组合在一起达一定的时间段，所述条件和时间段足以允许包括在存在于所述一个或多个流体样品上的情况下的所述目标核酸和所述内部对照核酸的核酸在所述固体支持材料上固定化，

c.在分离站中将所述固体支持材料与存在于所述流体样品中的其它材料分离，

d.在所述分离站中纯化所述核酸，并且用清洗缓冲剂清洗所述固体支持材料一次或多次，

e.在至少两个反应容器中使纯化的目标核酸和纯化的内部对照核酸接触扩增试剂，所述扩增试剂包括针对每个所述目标核酸的不同引物组和探针以及针对所述内部对照核酸的包括由SEQ ID NO 2组成的第一引物和由SEQ ID NO 3组成的第二引物的引物组和由SEQ ID NO 1组成的探针，其中第一反应容器包括针对所述第一目标核酸的引物和探针，并且至少第二反应容器包括针对所述第二目标核酸的引物和探针，并且其中所述针对第一目标核酸的引物和探针不存在于所述第二反应容器，并且所述针对第二目标核酸的引物和探针不存在于所述第一反应容器，

f.在一定的条件下在所述反应容器中将所述纯化的目标核酸和所述纯化的内部对照核酸与所述扩增试剂孵育一定的时间段，所述条件和时间段足以发生指示所述目标核酸的存在或缺乏的扩增反应，

g.检测并测量由所述目标核酸的扩增产物生成的并且与所述目标核酸的浓度成比例的信号，并且检测并测量由所述内部对照核酸生成的信号，

其中对于所述第一和第二反应容器以及对于所述目标核酸和所述内部对照核酸，在步骤d.到g.中用于扩增和检测的条件是相同的。

6.权利要求5的方法，其中所述扩增试剂包括具有逆转录酶活性的聚合酶，所述方法在步骤e.和步骤f.之间进一步包括如下的步骤：在一定的条件下在所述反应容器中孵育所述纯化的核酸与所述一种或多种扩增试剂达一定的时间段，所述条件和时间段适合于通过所述具有逆转录酶活性的聚合酶发生RNA逆转录。

7.权利要求5至6中任一项的方法，其中所述内部对照核酸是RNA或DNA。

8.权利要求5至6中任一项的方法，其中所述内部对照核酸是装甲RNA(armored RNA)或噬菌体包装的DNA。

9.权利要求7的方法，其中所述内部对照核酸是装甲RNA(armored RNA)或噬菌体包装的DNA。

10.权利要求5，6，或9中任一项的方法，其中所述内部对照核酸的解链温度为50℃至90℃。

11.权利要求7的方法，其中所述内部对照核酸的解链温度为50℃至90℃。

12.权利要求8的方法，其中所述内部对照核酸的解链温度为50℃至90℃。

13.权利要求5，6，9，11，或12中任一项的方法，其中所述内部对照核酸具有高达500个碱基的长度。

14.权利要求7的方法，其中所述内部对照核酸具有高达500个碱基的长度。

15.权利要求8的方法，其中所述内部对照核酸具有高达500个碱基的长度。

16.权利要求10的方法，其中所述内部对照核酸具有高达500个碱基的长度。

17.权利要求5，6，9，11，12，或14-16中任一项的方法，其中所述内部对照核酸具有30％至70％的GC含量。