[发明专利]用于为核酸扩增作对照的寡核苷酸

说明书

发明领域

本发明属于体外诊断学的领域。在此领域内，它特别关注用于定性和/或定量目的扩增和检测对照核酸。

背景技术

在分子诊断学领域中，从许多来源中扩增核酸已经具有相当大的意义。用于核酸扩增和检测的诊断应用的例子是病毒(如人类乳头状瘤病毒(HPV)、西尼罗河病毒(WNV))的检测，或针对人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙肝病毒(HBV)和/或丙肝病毒(HCV)存在的献血常规筛查。此外，所述扩增技术适用于细菌目标(如分枝杆菌(mycobacteria))，或肿瘤学标志物的分析。

最突出和广泛使用的扩增技术是聚合酶链式反应(PCR)。其它扩增反应特别包括连接酶链式反应、聚合酶连接酶链式反应、缺口-LCR，修复链式反应、3SR、NASBA、链置换扩增(SDA)、转录介导的扩增(TMA)以及Qβ-扩增。

用于基于PCR的分析的自动化系统经常利用在PCR过程期间在同一反应容器中的产物扩增的实时检测。这种方法的关键在于使用携带报告基团或标记物的经修饰的寡核苷酸。

已经表明在同一容器中扩增和检测超过一种目标核酸是可能的。此方法通常称作“多重(multiplex)”扩增，并且如果进行实时检测，那么需要用于区分的不同标记物。

出于定性(性能(performance)对照)和/或定量(使用对照作为参考确定目标核酸的量)的目的，使用具有已知序列的对照核酸来为相应的扩增作对照在临床核酸诊断学领域中通常是期望的或者甚至是强制性的。考虑到特别是诊断目标(包括原核、真核以及病毒核酸)的多样性，以及考虑到不同类型核酸(如RNA和DNA)之间的多样性，通常以特定方式设计对照核酸。

EP 2759604公开了一种用于检测一组非竞争性内部对照核酸(non-competitive internal control nucleic acid)的方法。

本文中所描述的是用于此目的的经改善的寡核苷酸和方法。

发明内容

本文中所描述的第一方面是具有SEQ ID NO 1的序列的分离的寡核苷酸(an isolated oligonucleotide with the sequence of SEQ ID NO 1)。此寡核苷酸可以作为探针使用以实现对包括SEQ ID NO 4的序列的对照核酸的改善的检测。

因此，本文中描述的另一方面是具有SEQ ID NO 1的探针用于检测包括SEQ ID NO 4的对照核酸的用途。

SEQ ID NO 4的序列是一种杂混序列(scrambled sequence)，其不与任何天然存在的序列显示任何显著的同源性，使得它可以充当非竞争性内部对照核酸序列以定性和/或定量检测多个目标核酸，如EP 2759604中所述的。

在核酸扩增测定法(例如PCR测定法，如实时PCR测定法)中，可以用包括具有SEQ ID NO 2的第一引物和具有SEQ ID NO 3的第二引物的特异性引物组有效扩增SEQ ID NO 4。

因此，本文中所描述的一个方面是包括具有SEQ ID NO 1、2和3的寡核苷酸的组合物。

这些核酸可以以套组(kit-of-parts)提供给技术人员，所述套组还包括适当的扩增和检测目标，即具有SEQ ID NO 4的序列的对照核酸。

因此，本文中所描述的另一方面是用于为多个目标核酸的检测作对照的试剂盒(kit)，所述试剂盒包括具有SEQ ID NO 1的检测探针，具有SEQ ID NO2和SEQ ID NO 3的扩增引物对，以及包括SEQ ID NO 4的对照核酸。