[发明专利]一种甘蓝叶片小RNA的提取方法

权利要求书

1.一种甘蓝叶片小RNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、采集甘蓝叶片，立即于液氮中速冻，之后放于-80℃冰箱待用；

步骤二、取步骤一处理过的甘蓝叶片，置于液氮预冷的研钵中研磨成粉末，并向粉末中加入CTAB裂解液于离心管，混匀，室温放置3~5min，之后于离心机上12000rpm，4℃，离心5~10min；所述CTAB裂解液与所述甘蓝叶片的质量比为5:1；

步骤三、取步骤二离心所得液体的上清液，转移至新的离心管中，并向其中加入小RNA提取液，混匀，室温放置3~5min，之后于离心机上12000rpm，4℃，离心5~10min；所述小RNA提取液与步骤二所述CTAB裂解液的质量比为1:1；

步骤四、取步骤三离心所得液体的上清液，转移至新的离心管中，并向其中加入上清液体积1/5的氯仿和异戊醇混合液，混匀，室温放置3~5min，之后于离心机上12000rpm，4℃，离心15~20min；

步骤五、取步骤四离心所得液体的上清液放于新的离心管中，并加入与上清液等体积的异丙醇，混匀，放于-20℃冰箱中静置1~2h，之后于离心机上12000rpm，4℃，离心10~15min；

步骤六、弃步骤五离心所得上清液，留沉淀，并用75%乙醇溶液清洗沉淀；室温晾干，再用RNasefreeddH₂O溶解沉淀，即得到甘蓝叶片小RNA。

2.根据权利要求1所述的一种甘蓝叶片小RNA的提取方法，其特征在于所述甘蓝叶片为甘蓝幼叶或甘蓝老叶。

3.根据权利要求1所述的一种甘蓝叶片小RNA的提取方法，其特征在于步骤二所述CTAB裂解液配方为：4M异硫氰酸胍，2%（W/V）CTAB，100mMTris-HCL，20mMEDTA，1.4MNaCl，2%(W/V)PVP，2%(V/V)β-巯基乙醇。

4.根据权利要求1所述的一种甘蓝叶片小RNA的提取方法，其特征在于所述75%乙醇溶液由无水乙醇和RNasefreeddH₂O按体积3:1配制。

5.根据权利要求1所述的一种甘蓝叶片小RNA的提取方法，其特征在于所述氯仿和异戊醇混合液由氯仿和异戊醇按体积比24:1配制。