[发明专利]一种养分高效利用转基因玉米材料快速鉴定的方法在审
| 申请号： | 201510547170.6 | 申请日： | 2015-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN105132546A | 公开（公告）日： | 2015-12-09 |
| 发明（设计）人： | 何文铸;陈洁;冷益丰;谭君;杨麟;唐海涛;康继伟;杨俊品;张彪;徐国伦;蔡明鸿;何远远 | 申请（专利权）人： | 四川省农业科学院作物研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 | 代理人： | 董芙蓉 |
| 地址： | 610066 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 养分 高效 利用 转基因 玉米 材料 快速 鉴定 方法 | ||
1.一种养分高效利用转基因玉米材料快速鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)除草剂首次筛选：将种植的养分高效利用转基因玉米材料在苗期玉米5～6叶一心，喷施浓度为1200～1300mg/L草铵膦除草剂6～8d后筛选，玉米植株枯萎褐化直至死亡为阴性材料即非转基因植株，余下正常生长植株初步鉴定为养分高效利用转基因玉米植株；
(2)叶片Bar试纸条快速检测：将苗期筛选正常生长的转基因玉米植株叶片在喇叭口期玉米植株9～10叶一心时，进行Bar试纸条检测10～15min,仅出现控制线的试纸条检测结果为阴性，即为非转基因植株；同时出现控制线和测试线的试纸条检测结果为阳性，即为养分高效利用转基因玉米植株：
(3)除草剂二次筛选和基因组的PCR检测：将喇叭口期筛选出的转基因玉米植株待玉米植株生长到抽雄吐丝期，再次喷施浓度为1200～1300mg/L草铵膦除草剂6～8d筛选，玉米植株枯萎发黄直至死亡为阴性材料即非转基因植株，余下正常生长植株鉴定为养分高效利用转基因玉米植株；同时取样除草剂二次筛选后的转基因玉米叶片用于提取基因组DNA，待药效明显后再对正常生长的玉米材料提取基因组DNA进行PCR检测。
2.根据权利要求1所述的养分高效利用转基因玉米材料快速鉴定的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述养分高效利用转基因玉米材料为转phyAO、AMT1-1、DvASN、DvGS2、GPPAT基因玉米材料；所述草铵膦除草剂的浓度为1250mg/L。
3.根据权利要求1或2所述的养分高效利用转基因玉米材料快速鉴定的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述Bar试纸条检测是用1.5ml离心管取管盖大小叶片，加入0.5ml提取液反复研磨至匀浆，箭头端向下插入Bar试纸条，待试纸条浸入研磨液10～15min后观察结果。
4.根据权利要求1～3之一所述的养分高效利用转基因玉米材料快速鉴定的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述草铵膦除草剂的浓度为1250mg/L；所述PCR引物为
phyAO正向CAGTCCCCGCCTCGAGAAAT
phyAO反向TGCCGTTGTACAGACCCAAA
AMT1-1正向TGGTCCGCTACAAGAACG
AMT1-1反向GCTCAGGTAAGCAATGAAAGT
DvASN正向CACCACGAGTTCACCTTCACAG
DvASN反向CATCAATCCAGTTGTAGCCCAC
DvGS2正向CACCCAAGCAACACTCGT
DvGS2反向CACAGGCAGAGGGATACG
PPATBamHfwCGCGGATCCGCGATGGCAGCTCCGGAAGATTC
PPATSmaIrevTCCCCCGGGGGAGAGAGTTTATATATGATGAGTT。
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