[发明专利]3T3-L1前脂肪细胞系的诱导分化方法

权利要求书

1.3T3-L1前脂肪细胞系的诱导分化方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)、3T3-L1前脂肪细胞系经复苏，培养，传代后，至长满培养基，继续培养36-48小时后进行诱导分化；

(b)、所述诱导分化为：加入含有诱导剂的含10％胎牛血清的高糖DMEM培养液，培养72-96小时；其中，所述诱导剂各成分在所述高糖DMEM培养液中的终浓度为：地塞米松0.9-1.1μM，IBMX1.0mM，胰岛素1.8-2.0μM；

(c)、加入含有1.8-2.0μM胰岛素和10％胎牛血清的高糖DMEM培养液继续诱导48-96小时；之后每48小时换液一次，换液为含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基，自加入诱导剂起第8-10天成熟脂肪细胞可用；

所述复苏为：

从液氮中取出细胞株，立即置于37±2℃水浴中，至细胞液完全溶解时取出，于室温1000-1200rpm离心3-5min，弃去上清，加入培养液，吹打重悬，将细胞悬液加入培养器皿中，然后将所述培养器皿置于5％±1％CO₂的37±2℃恒温培养箱中培养；

所述复苏中的培养液为含10％±2％小牛血清和1％±0.1％青链霉素的高糖DMEM培养液。

2.根据权利要求1所述的诱导分化方法，其特征在于，所述细胞悬液的细胞浓度为1×10⁵-6×10⁵个/ml。

3.根据权利要求2所述的诱导分化方法，其特征在于，细胞密度为75％-85％时进行所述传代。

4.根据权利要求3所述的诱导分化方法，其特征在于，所述传代具体为：移去培养液，用PBS溶液洗2-3次，加入胰蛋白酶消化28-35s，终止消化，吹打后，1000-1200rpm离心3-5min，去上清，加入培养液，吹打使细胞分散；取含有细胞的培养液加入孔板，置于5％±1％CO₂的37±2℃恒温培养箱中培养。

5.根据权利要求4所述的诱导分化方法，其特征在于，孔板中的细胞浓度为3×10⁵-5×10⁵个/ml。

6.根据权利要求1-5任一项所述的诱导分化方法，其特征在于，所述诱导分化在6-10cm培养皿或4-64孔板中的任一种中进行。