[发明专利]3T3-L1前脂肪细胞系的诱导分化方法

说明书

本发明涉及脂肪细胞诱导领域，特别涉及3T3‑L1前脂肪细胞系的诱导分化方法：3T3‑L1前脂肪细胞系经复苏，培养，传代后，至长满培养基，继续培养36‑48小时后加入含有诱导剂的含10％胎牛血清的高糖DMEM培养液进行诱导分化72‑96小时；诱导剂中地塞米松0.9‑1.1μM，IBMX 1.0mM，胰岛素1.8‑2.0μM；加入含有胰岛素和胎牛血清的高糖DMEM培养液继续诱导48‑96小时；之后每48小时换液一次，自加入诱导剂起第8‑10天成熟脂肪细胞可用。该诱导分化方法缩短整个3T3‑L1前脂肪细胞系的诱导过程，且脂肪细胞转化率稳定，不受细胞代数及细胞培养皿类型的影响，转化率误差在5％以内。

技术领域

本发明涉及脂肪细胞诱导领域，具体而言，涉及3T3-L1前脂肪细胞系的诱导分化方法。

背景技术

随着人们生活水平的提高，肥胖及其相关疾病的发病率日益增加，由此而造成的家庭及社会经济负担不断加重。脂肪细胞代谢及功能紊乱是导致肥胖的核心机制之一，有关脂肪细胞的研究已成为目前研究热点。在体外研究中，脂肪细胞模型是研究脂肪代谢及其功能的重要工具。

3T3-L1前脂肪细胞系源于小鼠胎盘的成纤维细胞群，细胞形态上类似成纤维细胞，呈长梭形。研究发现它是一种能够增殖并在一定条件下向脂肪细胞分化的前体细胞。目前，现已成为诱导分化为脂肪细胞最为常用的细胞系。

对3T3-L1前脂肪细胞系而言，传统诱导方法是在3T3-L1前脂肪细胞融合2天后，用加入含IBMX、地塞米松、胰岛素的培养基培养2天，后续再用含胰岛素的培养基培养2天，之后采用普通高糖DMEM培养基培养，此种方法既往称之为“鸡尾酒”诱导法。随着研究的深入，发现传统“鸡尾酒”诱导法存在诱导周期长、脂肪细胞转化率低且不均匀等缺点。此外，该诱导法还会受细胞的代数以及细胞培养皿类型的影响。如此以来，难以为研究者提供数量一致、分化稳定的脂肪细胞。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种3T3-L1前脂肪细胞系的诱导分化方法，脂肪细胞转化率稳定，不受细胞代数及细胞培养皿类型的影响。其中，在在不同类型细胞培养器皿中诱导的脂肪细胞的转化率误差在5％以内。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

3T3-L1前脂肪细胞系的诱导分化方法，包括以下步骤：

(a)、3T3-L1前脂肪细胞系经复苏，培养，传代后，至长满培养基，继续培养36-48小时后进行诱导分化；

(b)、所述诱导分化为：加入含有诱导剂的含10％胎牛血清的高糖DMEM培养液，培养72-96小时；其中，所述诱导剂各成分在所述高糖DMEM培养液中的终浓度为：地塞米松0.9-1.1μM，IBMX 1.0mM，胰岛素1.8-2.0μM；

(c)、加入含有1.8-2.0μM胰岛素和10％胎牛血清的高糖DMEM培养液继续诱导48-96小时；之后每48小时换液一次，换液为含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基，自加入诱导剂起第8-10天成熟脂肪细胞可用。

本发明提供的3T3-L1前脂肪细胞系诱导分化方法，参照传统“鸡尾酒”诱导法，通过延长诱导剂作用时间发现，该法可缩短整个3T3-L1前脂肪细胞系的诱导过程，且脂肪细胞转化率稳定，不受细胞代数及细胞培养皿类型的影响。其中，在不同类型细胞培养皿诱导的脂肪细胞的转化率误差在5％以内。

优选地，所述复苏为：

从液氮中取出细胞株，立即置于37±2℃水浴中，至细胞液完全溶解时取出，于室温1000-1200rpm离心3-5min，弃去上清，加入培养液，吹打重悬，将细胞悬液加入培养器皿中，然后将所述培养器皿置于5％±1％CO₂的37±2℃恒温培养箱中培养。