[发明专利]有机碳生物活性的分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子检测技术领域，尤其涉及一种有机碳生物活性的分析方法。

背景技术

海洋占地球表面积71％，已知人类活动产生的二氧化碳大约有1/3被海洋吸收，海洋碳循环对全球气候变化影响重大。

海洋中的有机碳主要是以溶解有机碳的形式存在的。溶解有机碳中约有95％是生物难以利用的惰性有机碳(Eichinger et al.,2006；Hansell et al.,2009)，可在海洋中储存长达数千年，其总量可与大气二氧化碳的总碳量相媲美，构成了海洋储碳。

海洋微型生物是海洋惰性有机碳主要来源，微型生物将活性有机碳转化为惰性有机碳，长期储存于海洋中(Jiao et al.,2010)。此生物过程对于应对全球变暖具有极其重要的意义。溶解有机碳的生物活性的鉴定对于评估有机碳在海洋储碳库中的作用具有重要意义。对于我们全面理解海洋在全球气候变化的作用意义重大。

然而，对于有机碳的生物活性却长期以来缺乏定量分析的方法，极大地制约了人们对海洋碳库及海洋储碳的过程与机制的认识。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可实时定量分析有机碳对海洋细菌生物活性的有机碳生物活性的分析方法。

本发明包括以下步骤：

1)将有机碳配制成水溶液，得有机碳储备液；

2)将步骤1)得到有机碳储备液过滤灭菌。

3)将待分析的细菌接种到培养基M1中进行前培养，使得菌体浊度达到OD600＝1，将菌液离心，去上清，收集菌体，在菌体中加入NaCl，悬浊后再次离心，最后将菌体用NaCl悬浊，得菌体前培养液；

4)将储备液M2装入培养瓶中，再加入灭菌蒸馏水、有机碳储备液、菌体前培养液，将培养瓶加盖，放入微活性量热仪中培养，记录培养过程中的热量变化，进行有机碳生物活性分析。

在步骤1)中，所述有机碳可采用天然有机碳或人工合成有机碳；所述天然有机碳可选自糖类、氨基酸、有机酸等中的至少一种；所述有机碳储备液的pH值可为7，配制终浓度为10倍浓度的有机碳储备液。

在步骤2)中，所述过滤灭菌可用0.22μm已经灭菌的微孔滤膜过滤灭菌。

在步骤3)中，所述培养基M1的组成可为1L中含有Bacto Peptone,1.0g；yeast extract,1.0g；KCl,0.3g；MgSO₄·7H₂O,0.5g；CaCl₂·2H₂O,0.038g；NH₄Cl,0.3g；K₂HPO₄,0.3g；NaCl,20.0g；1mL微量元素溶液，pH 7.8；所述微量元素溶液1L中含有FeSO₄·7H₂O，2.1g；H₃BO₃，30mg；MnCl₂·4H₂O，0.1g；CoCl₂·6H₂O，0.19g；CuCl₂·6H₂O，2mg；ZnSO₄·7H₂O，0.144g；Na₂MoO₄·2H₂O，36mg；

所述离心的条件可为8000g离心5min；所述在菌体中加入NaCl可在菌体中加入与菌液等量的质量百分浓度为0.8％的NaCl；所述再离心的条件可为8000g再离心5min；所述最后将菌体用NaCl悬浊可将菌体用与菌液等量的质量百分浓度为0.8％的NaCl悬浊。