[发明专利]从三棱中提取三棱二苯乙炔单体化合物的方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种从三棱中提取三棱二苯乙炔单体化合物的方法，以及该三棱二苯乙炔单体化合物在制备抗肝癌、抗肺癌药物中的应用。

背景技术

三棱为黑三棱科植物黑三棱(Sparganium stolonierum,Buch.-Ham)的干燥块茎，其味苦、性平、入肝、脾经，具有破血行气、消积止痛等功效。目前三棱一般整个或切片炮制入药，缺乏必要的药效物质基础和药效研究，缺乏合理的质量控制标准，难以确保临床用药的有效性、安全性、可持续性。可见，对三棱的化学成分进行进一步提取和研究非常有必要。

董学等在“三棱的化学成分”(药学学报[J].2008,43(1):63-66)提出以三棱为原料进行有效成分提取：块茎粉碎后，用95％乙醇提取两次；提取液浓缩后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，氯仿萃取物经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇梯度洗脱后，得到三棱二苯乙炔。但是使用该方法步骤繁琐，批次间重复性差，成本高，得到的三棱二苯乙炔含量少，得率比较低，这大大限制了三棱二苯乙炔的进一步研究和应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有问题的不足，提供一种从三棱中提取三棱二苯乙炔单体化合物的方法，该方法采用二维高效液相色谱进行分离纯化，得到具有生物活性的三棱二苯乙炔单体化合物，分离方法稳定，重复性高，制备量大，操作简单省时，成本低，三棱二苯乙炔提取率高。

本发明所采用的技术方案为：

一种从三棱中提取三棱二苯乙炔单体化合物的方法，该方法包括以下步骤：

(1)超低温粉碎：取干燥的三棱为原料，进行超微粉碎5～20min，得到超微粉；

(2)乙酸乙酯提取：在超微粉中加入乙酸乙酯，乙酸乙酯的加入体积(L)为超微粉质量(Kg)的8～10倍，70～75℃加热1～3小时进行提取，离心取沉淀重复1～3次，合并提取的上清并浓缩干燥，为粗提组分；

(3)色谱分离：

(a)一维分离：取粗提组分用40％乙醇-正己烷溶液(乙醇与正己烷按体积比4︰6配比而成，下同理)20～60℃超声溶解至浓度为60～100mg/ml，过膜后进行液相色谱分离，采用的色谱柱为Silica正相硅胶色谱柱，采用A流动相为正己烷、B流动相为乙醇的二元流动相体系，进样量为100～150mL/针，流动相流速为550～600mL/min，洗脱方式为B相浓度由0％至30％梯度洗脱50-60min，检测波长为210～280nm，根据紫外吸收光谱收集10-17.5min洗脱液作为目的组分，经浓缩、干燥，得到一维液相组分；

(b)二维分离：取一维液相组分用40％乙醇-正己烷溶液20～60℃超声溶解至浓度为60～100mg/ml，过膜后进行液相色谱分离，采用的色谱柱为Agela Inoval Silica正相硅胶色谱柱，采用A流动相为正己烷、B流动相为乙醇的二元流动相体系，进样量为1～4mL/针，流动相流速为12～16mL/min，洗脱方式为B相浓度5％等度洗脱25-30min，检测波长为210～280nm，根据紫外吸收光谱分别收集16-18min洗脱液作为目的组分，经浓缩、干燥，得到目的化合物三棱二苯乙炔。

作为优选，所述步骤(1)中超微粉碎时间为12min。

作为优选，所述步骤(2)中乙酸乙酯提取的温度为72℃。

作为优选，所述步骤(3)中粗提组分溶解于40％乙醇-正己烷溶液的浓度为80mg/ml。

作为优选，所述步骤(3)一维分离中色谱柱的直径为150mm、柱长为250mm，其中硅球粒径为10μm、孔径为10nm。

作为优选，所述步骤(3)二维分离中色谱柱的直径为20mm、柱长为250mm，其中硅球粒径为10μm、孔径为100A。

本发明进一步提供上述提取得到的三棱二苯乙炔单体化合物在制备抗肝癌药物中的应用。该三棱二苯乙炔单体化合物作为有效成分，按常规方法如口服、注射，与药学上的可接受载体或赋形剂，制成适合口服、注射等给药方式的剂型，如：片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、丸剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片、注射剂、软膏剂、栓剂、吸入剂等多种剂型。

本发明还进一步提供上述提取得到的三棱二苯乙炔单体化合物在制备抗肺癌药物中的应用。该三棱二苯乙炔单体化合物作为有效成分，按常规方法如口服、注射，与药学上的可接受载体或赋形剂，制成适合口服、注射等给药方式的剂型，如：片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、丸剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片、注射剂、软膏剂、栓剂、吸入剂等多种剂型。