[发明专利]菜用大豆中平头炭疽菌的特异性PCR检测引物及其检测方法

权利要求书

1.菜用大豆平头炭疽菌Colletotrichum truncatum特异性PCR检测引物，其特征在于：引物序列为：

上游引物CTF1：5'- CCCTGAAAAGGACGTCTCC -3'，

下游引物CTR1：5'- GCTAGAGTCCCTCCGAATCC -3'；

对菜用大豆平头炭疽菌Colletotrichum truncatum特异性扩增出426bp的产物。

2.一种利用权利要求1所述引物检测菜用大豆中平头炭疽菌Colletotrichumtruncatum的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

（1）提取待测样品基因组DNA；

（2）以步骤（1）提取的DNA为模板，利用CTF1/CTR1这一对引物进行PCR扩增，PCR扩增的条件为：PCR反应体系25 µL，包括2×Taq PCR Master Mix 12.5µL，10 µmol/L引物CTF1/CTR1各1.0µL，2.0×10-5～200 ng DNA 模板，用无菌超纯水补足至25 µL；扩增参数为95 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，58 ℃退火45 s，72 ℃延伸30 s，共35个循环，最后72 ℃延伸10 min；

（3）取5.0 µL步骤（2）的PCR扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶进行电泳分离，电压为4-5V/cm，电泳40 min后经溴化乙锭染色于紫外灯下观察，根据扩增产物的有无及其片段大小对结果进行判断，如果能特异性地扩增出426bp的产物，即可判断所述的检测样品中存在平头炭疽菌Colletotrichum truncatum。

3.如权利要求1所述的引物在田间菜用大豆中平头炭疽菌Colletotrichum truncatum的早期诊断和该病菌的监测和鉴定上的应用。