[发明专利]菜用大豆中平头炭疽菌的特异性PCR检测引物及其检测方法有效

专利信息
申请号: 201510562460.8 申请日: 2015-09-08
公开(公告)号: CN105063226B 公开(公告)日: 2018-05-18
发明(设计)人: 兰成忠;阮宏椿;杜宜新 申请(专利权)人: 福建省农业科学院植物保护研究所
主分类号: C12Q1/689 分类号: C12Q1/689;C12N15/11;C12R1/645
代理公司: 福州元创专利商标代理有限公司 35100 代理人: 蔡学俊
地址: 350013 福建省福*** 国省代码: 福建;35
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摘要:
搜索关键词: 大豆 平头 炭疽 特异性 pcr 检测 引物 及其 方法
【权利要求书】:

1.菜用大豆平头炭疽菌Colletotrichum truncatum特异性PCR检测引物,其特征在于:引物序列为:

上游引物CTF1:5'- CCCTGAAAAGGACGTCTCC -3',

下游引物CTR1:5'- GCTAGAGTCCCTCCGAATCC -3';

对菜用大豆平头炭疽菌Colletotrichum truncatum特异性扩增出426bp的产物

2.一种利用权利要求1所述引物检测菜用大豆中平头炭疽菌Colletotrichumtruncatum的方法,其特征在于:具体包括以下步骤:

(1)提取待测样品基因组DNA;

(2)以步骤(1)提取的DNA为模板,利用CTF1/CTR1这一对引物进行PCR扩增,PCR扩增的条件为:PCR反应体系25 µL,包括2×Taq PCR Master Mix 12.5µL,10 µmol/L引物CTF1/CTR1各1.0µL,2.0×10-5~200 ng DNA 模板,用无菌超纯水补足至25 µL;扩增参数为95 ℃预变性5 min,94 ℃变性30 s,58 ℃退火45 s,72 ℃延伸30 s,共35个循环,最后72 ℃延伸10 min;

(3)取5.0 µL步骤(2)的PCR扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶进行电泳分离,电压为4-5V/cm,电泳40 min后经溴化乙锭染色于紫外灯下观察,根据扩增产物的有无及其片段大小对结果进行判断,如果能特异性地扩增出426bp的产物,即可判断所述的检测样品中存在平头炭疽菌Colletotrichum truncatum

3.如权利要求1所述的引物在田间菜用大豆中平头炭疽菌Colletotrichum truncatum的早期诊断和该病菌的监测和鉴定上的应用。

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