[发明专利]用于在马克思克鲁维酵母营养缺陷型菌株中进行外源基因分泌表达的重组载体

权利要求书

1.一种用于在马克思克鲁维酵母营养缺陷型菌株中进行外源基因分泌表达的重组载体，其特征在于，按照顺序包括氨苄抗性基因、PKD1载体、菊粉酶启动子、信号肽、多克隆位点、菊粉酶终止子、营养基因启动子、营养基因开放阅读框。

2.根据权利要求1所述的重组载体，其特征在于，所述信号肽选自菊粉酶信号肽、或酵母alpha因子信号肽中的任意一种或几种。

3.根据权利要求1所述的重组载体，其特征在于，所述营养基因为马克斯克鲁维菌株URA3基因。

4.根据权利要求1所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体的DNA序列为SEQIDNo.1或SEQIDNo.2。

5.根据权利要求1所述的重组载体，其特征在于，所述多克隆位点选自限制性酶切位点SmaI、XmaI、SpeI、NotI中的任意一种或几种。

6.一种构建权利要求1所述重组载体的方法，其特征在于，包括：

扩增pUC19质粒、PKD1载体，获得pUC19与PKD1连接的片段I；

扩增马克思克鲁维酵母基因组，获得包含营养基因启动子或ORF的片段II；

扩增马克思克鲁维酵母基因组，获得包含菊粉酶基因启动子、菊粉酶信号肽、和部分多克隆位点的片段III；

扩增马克思克鲁维酵母基因组，获得包含菊粉酶终止子和部分多克隆位点的片段IV，

将片段I、II、III、IV进行连接，获得重组载体。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，获得pUC19与PKD1连接的片段I方法如下：

扩增pUC19质粒得到A片段，扩增Gateway系统载体的pcYGW获得B片段，

扩增PKD1载体获得C片段，将A、B和C片段连接，将连接得到的质粒进行扩增，得到包括pUC19与PKD1的片段I。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：

扩增获得含有酵母alpha因子信号肽的片段，作为引物对所得重组载体进行突变。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，扩增PPIC9K载体获得含有所述酵母alpha因子信号肽的片段。

10.一种转化子，其特征在于，将外源基因插入到权利要求1所述重组载体的多克隆位点中，获得含有外源基因的质粒，将所述质粒转入营养基因缺陷型菌株中，获得所述转化子。