[发明专利]一种黑色素细胞的培养方法

权利要求书

1.一种黑色素细胞的培养方法，其特征在于，包括在黑色素细胞增殖培养之前先进行预培养2-4h，预培养的接种密度为2-10×10⁴个细胞/cm²；所述预培养基为：

DMEM培养基与Ham's F-12培养基按体积比2-4:1混合；

腺嘌呤1.6-2.0×10^-4M；

青霉素80-100单位/mL；

链霉素80-120μg/mL；

氢化可的松0.1-0.5μg/mL；

胰岛素2-6μg/mL；

表皮生长因子5-12ng/mL；

霍乱毒素0.8-1.5×10^-10M；

胎牛血清4-7％；

在预培养之前还包括：将离体的表皮用分解混合酶进行消化培养0.5-2小时，终止消化后，过滤、离心，然后接种预培养基进行预培养；所述分解混合酶为胰蛋白酶和I型胶原酶；

预培养后，去掉预培养基，然后将贴壁后的细胞转移到增殖培养基，所述增殖培养基为M2培养基；

所述增殖培养的方法为：每周换液3次，当细胞达到70-80％饱和后，对黑色素细胞进行消化，回收，重悬，播种进行扩增传代；

对黑色素细胞进行消化的方法为：将1g/L胰蛋白酶·0.152g/L EDTA溶液加入到培养基中，孵育3-5min，终止消化；

所述播种的密度为5-10×10³个细胞/cm²。

2.根据权利要求1所述的黑色素细胞的培养方法，其特征在于，所述预培养基为：DMEM培养基与Ham's F-12培养基按体积比3:1混合；

腺嘌呤1.8×10^-4M；

青霉素100单位/mL；

链霉素100μg/mL；

氢化可的松0.4μg/mL；

胰岛素5μg/mL；

表皮生长因子10ng/mL；

霍乱毒素1.2×10^-10M；

胎牛血清5％。

3.一种黑色素细胞悬液制剂的制备方法，其特征在于，将利用权利要求1-2任一项所述的培养方法培养传代3-4代后的黑色素细胞消化、离心，用不含抗生素的M2培养基重悬细胞。