[发明专利]一种弓形虫GRA10复合表位肽及其制备的疫苗

说明书

本发明公开了一种弓形虫GRA10复合表位肽及其制备的疫苗，将筛选出的弓形虫GRA10的三段表位(GRA10_80‑94、GRA10_161‑169、GRA10_192‑215)人工合成为复合表位肽，与乳化交联法获得的壳聚糖微球相结合，获得装载弓形虫GRA10复合表位肽的壳聚糖微球疫苗。本发明的微球疫苗可有效地增强体液免疫和细胞免疫反应，有效地降低免疫小鼠在接受弓形虫PRU株(II型)攻击后大脑包囊的形成率，以及延长弓形虫攻击后小鼠的存活时间。该疫苗可作为预防弓形虫感染，控制宿主脑组织中包囊形成的有效候选疫苗。

技术领域

本发明涉及弓形虫疫苗领域，具体涉及一种弓形虫GRA10复合表位肽及其制备的疫苗，其基于弓形虫GRA10的复合抗原表位，用壳聚糖微球装载的弓形虫疫苗，用于人或动物弓形虫病的预防。

背景技术

弓形虫(Toxoplasma gondii)是世界性分布的寄生原虫，广泛寄生于人体及动物的有核细胞内，引起严重的人兽共患病。弓形虫感染孕早期妇女可导致流产、早产甚至死产，亦可通过胎盘引起新生儿畸形和胎儿眼部并发症。对于免疫力缺乏或者低下的人群(如艾滋病和肿瘤患者)，弓形虫可导致严重的临床症状(如弓形虫脑病)甚至死亡。在免疫功能正常的宿主体内，弓形虫往往形成慢性感染，引起不可逆的中枢神经系统和视力的损害。作为一种机会致病性胞内寄生的原虫，弓形虫在宿主体内主要引起细胞免疫反应，是通过识别抗原蛋白的十几个氨基酸序列发挥作用，这就是抗原表位。研制针对弓形虫同时具有人类及BALB/c小鼠MHC分子限制性T细胞表位和B细胞表位的新疫苗是非常迫切和必要的。

弓形虫GRA家族是构成弓形虫速殖子纳虫空泡膜和缓殖子囊壁的主要成分，在修饰调理纳虫泡形成过程中起着重要作用，其中GRA10蛋白更与虫体在胞内的生长和发育息息相关。我们通过筛选获得了GRA10蛋白的T细胞和B细胞优势表位，通过实验验证了这些表位肽的免疫保护性。

此外，疫苗载体的选择，对于疫苗的作用效果也极为关键；作为非病毒载体，微球颗粒材料具有较好的生物相容性和独特的理化性质，如易于加工修饰、促进功能分子入胞、保护DNA和蛋白质等免受降解，在疫苗载体或佐剂的研究与开发过程中逐渐成为关注的热点。针对弓形虫所使用种类的抗原，如何选择合适的载体来增强疫苗免疫效果，也是本领域内亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术中存在的上述问题，发明人通过实验研究，提供了一种弓形虫GRA10复合表位肽及其制备的疫苗。

首先，本发明提供了一种人工合成弓形虫GRA10蛋白复合表位肽—SGFSLSSGSGVSVVEGSLGYCALLPLGSTQSPPESRKKRRRSGKKKRGKRSV；

所述复合表位肽是通过如下方法获得的：用IEDB筛选出的同时具有人类及BALB/C小鼠MHC分子限制性的弓形虫GRA10的CD⁺8T细胞优势表位(GRA10_161-169)和CD⁺4T细胞优势表位(GRA10_80-94)，用DNAStar-Protean软件综合分析预测GRA10的B细胞优势表位(GRA10_192-215)，通过两个氨基酸序列GS连接起来，人工合成弓形虫GRA10复合表位肽。

其次，本发明提供了所述人工合成弓形虫GRA10复合表位肽用于制备弓形虫疫苗的应用；

优选的，用于制备用于预防和/治疗人或动物弓形虫病的疫苗。

进一步的，本发明提供了装载所述弓形虫GRA10复合表位肽的壳聚糖微球疫苗，可用于预防人或动物弓形虫病。