[发明专利]一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于其步骤如下：

（1）在LB液体培养基中接种大肠杆菌，培养，离心，收集菌体，100ml大肠杆菌培养液中的菌体重新混悬在5-10ml的LB液体培养基中，接入蛭弧菌，于25-37℃、pH6.0-8.5下培养36-48h，蛭弧菌培养液于4℃、6000rpm下离心20min，弃沉淀，取上清液于4℃、16000rpm离心20min，取沉淀，混悬于LB液体培养基中，制成浓度≥10¹¹cfu/ml的蛭弧菌浓缩液；

（2）将壳聚糖溶解于稀醋酸中，配制成壳聚糖溶液，取等体积的蛭弧菌浓缩液，与壳聚糖溶液混合均匀，得蛭弧菌混合液；

（3）在所述蛭弧菌混合液中逐滴加入三聚磷酸钠水溶液，充分搅拌，制成蛭弧菌包埋液，将该包埋液离心，取沉淀备用；

（4）将斜面培养的丁酸梭菌在RCM液体培养基中，于30-38℃、pH6.5-7.5下厌氧培养24-48h，再接种于RCM液体培养基中，于30-38℃、pH6.5-7.5的环境下厌氧培养24-48h，得丁酸梭菌培养液；

（5）将壳聚糖溶解于稀醋酸中，配制成壳聚糖溶液，按所述菌数比取丁酸梭菌培养液，与等体积的壳聚糖溶液混合均匀，得丁酸梭菌混合液；

（6）将步骤（3）所得的沉淀加入所述丁酸梭菌混合液中，然后逐滴加入三聚磷酸钠水溶液，充分搅拌，制成复合菌液。

2.根据权利要求1所述的微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于：步骤（2）和步骤（5）中，所述稀醋酸的体积浓度为1%，壳聚糖溶液的浓度为5-10mg/ml，壳聚糖粘均分子量为500-1800kd，三聚磷酸钠水溶液的浓度为1mg/ml，步骤（3）中三聚磷酸钠水溶液用量为蛭弧菌混合液体积的1-2倍，步骤（6）中三聚磷酸钠水溶液用量为丁酸梭菌混合液体积的2-5倍。

3.根据权利要求1或2所述的微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于所述复合菌液经离心、干燥制成复合菌颗粒剂。