[发明专利]一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用有效
申请号: | 201510565088.6 | 申请日: | 2015-09-08 |
公开(公告)号: | CN105039229B | 公开(公告)日: | 2019-06-14 |
发明(设计)人: | 陆安;贾永兵;杜红娜;王晔娜;李芳;郭永红 | 申请(专利权)人: | 河北普德动物药业有限公司 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;A61K35/742;A61K35/741;A61P1/12;C12R1/145;C12R1/01 |
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地址: | 050200 河北*** | 国省代码: | 河北;13 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 微生物 复合 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种微生物复合菌剂的制备方法,其特征在于其步骤如下:
(1)在LB液体培养基中接种大肠杆菌,培养,离心,收集菌体,100ml大肠杆菌培养液中的菌体重新混悬在5-10ml的LB液体培养基中,接入蛭弧菌,于25-37℃、pH6.0-8.5下培养36-48h,蛭弧菌培养液于4℃、6000rpm下离心20min,弃沉淀,取上清液于4℃、16000rpm离心20min,取沉淀,混悬于LB液体培养基中,制成浓度≥1011cfu/ml的蛭弧菌浓缩液;
(2)将壳聚糖溶解于稀醋酸中,配制成壳聚糖溶液,取等体积的蛭弧菌浓缩液,与壳聚糖溶液混合均匀,得蛭弧菌混合液;
(3)在所述蛭弧菌混合液中逐滴加入三聚磷酸钠水溶液,充分搅拌,制成蛭弧菌包埋液,将该包埋液离心,取沉淀备用;
(4)将斜面培养的丁酸梭菌在RCM液体培养基中,于30-38℃、pH6.5-7.5下厌氧培养24-48h,再接种于RCM液体培养基中,于30-38℃、pH6.5-7.5的环境下厌氧培养24-48h,得丁酸梭菌培养液;
(5)将壳聚糖溶解于稀醋酸中,配制成壳聚糖溶液,按所述菌数比取丁酸梭菌培养液,与等体积的壳聚糖溶液混合均匀,得丁酸梭菌混合液;
(6)将步骤(3)所得的沉淀加入所述丁酸梭菌混合液中,然后逐滴加入三聚磷酸钠水溶液,充分搅拌,制成复合菌液。
2.根据权利要求1所述的微生物复合菌剂的制备方法,其特征在于:步骤(2)和步骤(5)中,所述稀醋酸的体积浓度为1%,壳聚糖溶液的浓度为5-10mg/ml,壳聚糖粘均分子量为500-1800kd,三聚磷酸钠水溶液的浓度为1mg/ml,步骤(3)中三聚磷酸钠水溶液用量为蛭弧菌混合液体积的1-2倍,步骤(6)中三聚磷酸钠水溶液用量为丁酸梭菌混合液体积的2-5倍。
3.根据权利要求1或2所述的微生物复合菌剂的制备方法,其特征在于所述复合菌液经离心、干燥制成复合菌颗粒剂。
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