[发明专利]长效凝固因子及产生其的方法

说明书

本申请是2010年7月1日提交的题为“长效凝固因子及产生其的方法”的中国专利申请201080040296.X的分案申请。

相关申请的交叉参考

本申请要求美国临时申请系列号61/224,366的优先权。

发明领域

公开了包含附着至凝固因子C末端(羧基末端)的至少一个绒毛膜促性腺激素羧基末端肽(CTP)的多肽及编码其的多核苷酸。还公开了包含本发明多肽和多核苷酸的药物组合物及其使用方法。

发明背景

多肽在血液、肝或者肾中易于变性或者被酶降解。因此，多肽典型具有几小时的短循环半衰期。由于其低稳定性，肽药物通常以持续的频率(sustainedfrequency)递送，以维持活性肽的有效血浆浓度。此外，由于肽药物通常通过输注方式施用，频繁注射肽药物导致对象相当不舒适。因此，需要延长治疗性多肽半衰期且同时维持其高药学功效的技术。这种希望的肽药物在注射进人体时也应满足如下需要：增强的血清稳定性、高活性及诱导不希望的免疫应答的低可能性。

不利的药物动力学如短的血清半衰期可以阻止许多原本是有希望的药物候选物的药物开发。血清半衰期是分子的经验特征，并且对于每种新的潜在药物必须进行实验确定。例如，使用较低分子量的多肽药物，生理学清除机制如肾过滤可以使得难以维持药物的治疗水平，这是由于所需的给药方案的成本或者频率。相反，在药物或者其代谢物具有毒性副作用时，病不希望其具有较长的血清半衰期。

发明概述

在一个实施方案中，本发明提供了多肽，其由凝固因子及附着于所述凝固因子羧基末端的一至五个促性腺激素羧基末端肽(CTP)组成。

在另一个实施方案中，本发明还提供了多核苷酸分子，其包含编码由凝固因子及附着于所述凝固因子羧基末端的一至五个促性腺激素羧基末端肽组成的多肽的编码部分。

在另一个实施方案中，本发明还提供了延长凝固因子的生物学半衰期的方法，所述方法包括将一至五个绒毛膜促性腺激素羧基末端肽附着于所述凝固因子的羧基末端的步骤，由此改善凝固因子的生物学半衰期。

在另一个实施方案中，本发明还提供了改善凝固因子曲线下面积(AUC)的方法，所述方法包括将一至五个绒毛膜促性腺激素羧基末端肽附着于所述凝固因子羧基末端的步骤，由此改善凝固因子的曲线下面积(AUC)。

在另一个实施方案中，本发明还提供了降低凝固因子给药频率的方法，包括将一至五个绒毛膜促性腺激素羧基末端肽附着于所述凝固因子羧基末端的步骤，由此降低凝固因子的给药频率。

在另一个实施方案中，本发明还提供了在凝固因子治疗的使用中提高顺应性的方法，包括向有需要的对象提供多肽，所述多肽包含凝固因子、附着于所述凝固因子羧基末端的一至五个绒毛膜促性腺激素羧基末端肽，由此在凝固因子治疗的使用中提高顺应性。

附图简述

图1是rFVII-CTP构建体(A)、rFVII-CTP-CTP构建体(B)、rFIX-CTP构建体(C)、和rFIX-CTP-CTP构建体(D)的图示。

图2A是柱状图，其显示了在5μg/ml维生素K3的存在下，由FVII-CTP变体限制稀释的克隆转染的和选择的细胞的收获物。FVII水平使用FVIIElisa(AssayPro)来量化。

图2B是柱状图，其显示了在5μg维生素K3的存在下，由FVII-CTP变体限制稀释转染的和选择的细胞的收获物。FVII活性使用FVII生色活性测定(AssayPro)来量化。

图2C是柱状图，其显示了在5μg维生素K3的存在下，由FVII-CTP变体限制稀释转染的和选择的细胞的收获物。通过以活性值除以收获物FVII浓度计算。

图2D的图，显示了由与正常集合(poll)的人血浆凝固活性相比的FVII、FVII-CTP和FVII-(CTP)₂的凝固活性限制稀释转染的和选择的细胞的收获物。

图2E的图，显示了FVII、FVII-CTP-CTP和FVII-CTP收获物的PK谱。