[发明专利]大孔吸附树脂分离纯化辣蓼黄酮的工艺

说明书

本发明公开了一种大孔吸附树脂分离纯化辣蓼黄酮的工艺，该法以超声‑酶解偶联法提取的辣蓼总黄酮提取液为原料，经多种有机溶剂萃取后，将乙酸乙酯部分和正丁醇部分的黄酮利用大孔吸附树脂进一步分离纯化，获得了纯化辣蓼总黄酮。试验表明，本发明的工艺具有成本较低、稳定性高、吸附快、吸附容量大、洗脱率高、解吸条件温和、再生简便和使用周期长等优点，是一种理想的辣蓼总黄酮分离提纯工艺。

技术领域

本发明属于中草药辣蓼总黄酮的分离纯化技术，尤其涉及一种大孔吸附树脂分离纯化辣蓼黄酮的工艺。

背景技术

辣蓼(Polygonum hydropiper Linn.)在我国分布广泛，资源丰富，主要成分为鞣质、黄酮和挥发油，其中黄酮类化合物有：芦丁、槲皮素、金丝桃苷、山萘酚、异鼠李素。近年来国内外学者发现黄酮类化合物具有良好的抗菌、抗病毒、抗氧化活性，除此之外，还能降血压、降血脂，并能提高机体免疫力。

近年来，大孔吸附树脂被广泛运用于中草药有效成分的分离及新药的开发与研制，是一类有机高分子聚合物吸附剂，其具有价格便宜，稳定性高、吸附快，吸附容量大，洗脱率高，解吸条件温和，再生简便，使用周期长等优点。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种工艺简单方便、分离纯化效果好、再生使用周期长的大孔吸附树脂分离纯化辣蓼黄酮的工艺。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：大孔吸附树脂分离纯化辣蓼黄酮的工艺，包括以下步骤：

(1)利用超声-酶解偶联法对辣蓼药材进行总黄酮的提取；

(2)将步骤(1)获得的提取液依次经过石油醚、氯仿、乙酸乙酯以及正丁醇萃取，收集乙酸乙酯部分和正丁醇部分的黄酮，减压蒸干备用；

(3)将步骤(2)获得的乙酸乙酯部分和正丁醇部分的黄酮配制成浓度为0.5～1.5mg/mL的上柱液，通过预处理好的大孔吸附树脂，用60～80％乙醇洗脱4～10倍量柱体积，洗脱液进行蒸发浓缩，真空干燥，即得纯化辣蓼总黄酮。

预处理按以下操作进行：取大孔吸附树脂用无水乙醇浸泡24h充分溶胀之后装柱，用95％乙醇冲洗，收集洗脱液，检查洗脱液无浑浊即可停止收集洗脱液(方法为加入等体积的去离子水后无浑浊)，然后用去离子水洗脱，除去乙醇，；用4倍量柱体积的3％盐酸溶液冲洗，去离子水冲洗至中性；用4倍量柱体积的3％氢氧化钠溶液冲洗，去离子水冲洗至中性即可。

大孔吸附树脂为弱极性或极性的大孔吸附树脂。

大孔吸附树脂为D101、AB-8、DM-130或XDA-8型号。

步骤(1)按以下操作进行：

(1)将辣蓼药材干燥、粉碎，分别加入重量为辣蓼药材重量0.2～0.4％的果胶酶和纤维素酶，混合均匀，加入pH值为4.8的HAc-NaAc缓冲液，进行超声-酶解；

(2)用Na₂CO₃溶液调节超声-酶解后的溶液pH值为9.0，80～90℃水浴10～20min使酶失活；

(3)加入乙醇浸提24h，过滤收集浸提液，滤渣再加入乙醇溶液重复浸提一次，过滤，合并两次浸提液。

超声-酶解温度为30～60℃，时间为1.0～2.0h。

HAc-NaAc缓冲液与辣蓼药材的体积质量比为5～50mL∶1g。

步骤(3)中加入乙醇后，乙醇的终体积浓度为60～80％。