[发明专利]一种检测人类PEAR1基因多态性的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学领域临床检测技术中的基因检测技术，特别涉及一种检测人 类PEAR1基因多态性的试剂盒及其应用。

背景技术

血小板内皮聚集受体1(PEAR1)，一种新发现跨膜蛋白，参与了诱导血小板接触性 激活过程。胶原作用于血小板之后，PEAR1胞质内酷氨酸及丝氨酸残基磷酸化，从而使相互 接触的血小板形成更称稳定的血栓。PEAR1可以同时调节CRP-XL和二磷酸腺苷(adenosine diphosphate，ADP)形成通路，通路与PEAR1基因的rs2768759号和rs12041331两个SNP位点 相关，其基因多态性均可能影响抗血小板聚集药物(如阿司匹林等)的抗血小板作用。通过 对PEAR1基因多态性的检测，可以更好的了解患者对抗血小板聚集药物的治疗效果。

在本发明作出之前，目前进行基因突变检测的方法有数十种。金标准法为基因测 序法。基因测序法是目前应用最广泛、较准确的一种方法，但是该方法需要昂贵的仪器设备 和专业的人员进行操作，费时费力，在临床上很难进行推广。基因芯片法具有快速高通量的 优点，但是操作上复杂，步骤多，成本高也不易普及。以限制性酶切片段长度多态性(RFLP) 检测基因突变的方法具有成本低廉的优点，但是过程烦琐，时间长也不适合普及。

发明内容

本发明的目的就在于克服上述缺陷，研制一种检测人类PEAR1基因多态性的试剂 盒及其应用。

本发明的技术方案是：

一种检测人类PEAR1基因多态性的试剂盒，包括盒体和装于盒体内的物质，其主要 技术特征在于：所述盒体内的物质包括检测PEAR1基因上的rs2768759号位点的特异性引物 及特异性荧光探针、rs12041331号SNP位点的特异性引物及特异性荧光探针、TaqDNA聚合 酶、dNTP混合液、MgCl₂溶液、荧光定量PCR反应缓冲液和去离子水；

所述PEAR1基因上的rs2768759号位点特异性引物中的正义引物和反义引物的序 列为：

正义引物：5’-CCACCCTCAGCCCTATCACT-3’，

反义引物：5’-AGATTGAATCATGGGAGTGGG-3’；

所述PEAR1基因上的rs12041331号位点特异性荧光探针包括野生型探针和突变性 探针，它们的序列为：

野生型探针：5’-FAM-CACCTGTCCAGTTCC-MGB-3’

突变型探针：5’-HEX-CACCTGTCCCGTTCC-MGB-3’；

所述PEAR1基因上的rs12041331号位点特异性引物中的正义引物和反义引物的序 列为：

正义引物：5’-GGTGAGGGGTTATCCTATGCTAC-3’，

反义引物：5’-GATTAGAGTTCCTGGTGGACAAGA-3’；

所述PEAR1基因上的rs2768759号位点特异性荧光探针包括野生型探针和突变性 探针，它们的序列为：

野生型探针：5’-FAM-TCTCACTTCCATCACC-MGB-3’

突变型探针：5’-HEX-TCTCACTTCCGTCACC-MGB-3’。

所述盒体中各物质的含量为：浓度为10μM的特异性引物共0.45μl，其中正义引物 和反义引物各0.225μl；浓度为5μM的特异性荧光探针共0.2μl，其中野生型探针和突变型探 针各0.1μl；浓度为5单位/μl的TaqDNA聚合酶0.02μl；浓度为20mM的dNTP混合液0.1μl；浓 度为25mM的MgCl2溶液0.5μl；5X荧光定量PCR反应缓冲液2μl；去离子水4.73μl。

所述检测rs2768759号位点特异性引物中，正义引物的Tm值为58.4℃，反义引物的 Tm值为58.3℃；所述特异性荧光探针中，野生型探针的Tm值为69℃，突变型探针的Tm值为68 ℃；所述检测rs12041331号位点特异性引物中，正义引物的Tm值为58.7℃，反义引物的Tm值 为59.1℃；所述特异性荧光探针中，野生型探针的Tm值为66℃，突变型探针的Tm值为66℃。

所述试剂盒的保存温度为-20℃。

本发明另一技术方案是：