[发明专利]一种南极磷虾油中虾青素含量的测定方法

权利要求书

1.一种南极磷虾油中虾青素含量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、称取两份重量相同的南极磷虾油，每份0.2～0.5g，其中一份添加1ml虾青素标准品；

所述虾青素标准品的浓度为1.0、2.0或4.0μg/mL；

S2、向上述南极磷虾油中分别加入4～6ml无水乙醇溶解，加入0.105mol/L NaOH-乙醇溶液2ml，定容到10～25ml，充氮后在5℃层析柜中进行皂化反应3.5h；皂化完成后，加入0.100～0.105mol/L磷酸-乙醇溶液2～5ml终止反应；两份步骤S1所述南极磷虾油中各试剂的加入量均相同；

S3、混合、离心取上清液，过0.22μm微孔滤膜，分别进行HPLC检测分析；

S4、采用250mm×4.6mm×10μm规格的Hypersil C₁₈色谱柱对虾青素进行分离检测；流动相的流速为0.5～1.0mL/min，检测器为紫外检测器，检测波长为478nm，进样量为5～50μL，柱温为20～30℃；按比例二氯甲烷:甲醇:乙腈:水＝5.0:85.0:5.5:4.5，配制溶液A；按比例二氯甲烷:甲醇:乙腈:水＝22.0:28.0:45.5:4.5配制溶液B；以A、B为流动相进行梯度洗脱；洗脱条件:0min～8min，A流动相为100％，B流动相为0％；8min～56min：A流动相从100％降到0％，B流动相从0％升到100％；

S5、得出进样中游离虾青素的含量，得到加标回收率，进而获得南极磷虾油中虾青素含量，具体步骤为：

S51、利用液相色谱检分别测得步骤S2得到的两种样品游离虾青素的面积，并利用面积归一化法分别得到总面积，

总面积A＝A_全反式+1.1×A_9-顺+1.3×A_13-顺

其中，A_13-顺、A_全反式、A_9-顺分别为试样溶液中13-顺虾青素、全反式虾青素、9-顺虾青素的峰面积；1.1、1.3分别为9-顺虾青素和13-顺虾青素对全反式虾青素的校正因子；

S52、结合步骤S4所述检测条件下得到的虾青素标准曲线，得到步骤S2得到的两种样品游离虾青素的含量；

所述虾青素标准曲线为Y＝99.6569x-5.1469

其中，Y为步骤T1得到的总面积，x为游离虾青素含量；

S53、加标回收率：P＝(C₂-C₁)/C₀×100％，

其中C₂为步骤S2得到的添加有标准品的磷虾油样品中游离虾青素量；C₁为步骤S2得到的磷虾油样品中游离虾青素量；C₀为虾青素标准品添加量；

S54、利用加标回收率得到南极磷虾油中虾青素含量：

南极磷虾油中虾青素含量：C＝C₁/P。