[发明专利]一种用于富集与分离糖蛋白的分子印迹复合材料的制备方法

权利要求书

1.一种用于富集与分离糖蛋白的分子印迹复合材料的制备方法，其特征在于步骤如下：

(1)硼酸基功能化石墨烯的合成

将氧化石墨烯溶于去离子水中，超声分散，得到氧化石墨水溶液，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，搅拌20-40min后，加入3-氨基苯硼酸单水合物(APBA)，室温搅拌18-36h后，抽滤，分别用乙醇和水洗涤，抽滤、真空干燥得到硼酸基功能化的氧化石墨烯；氧化石墨烯水溶液的浓度为0.1～5mg/mL，超声时间为30～120min，氧化石墨烯、3-氨基苯硼酸单水合物、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1∶10∶6∶6～1∶3∶2∶2；

(2)分子印迹复合材料的制备

将上一步中所得到的硼酸基功能化石墨烯分散在含有模板糖蛋白的PBS缓冲溶液中，室温下反应6～12h，使糖蛋白充分组装到硼酸基功能化氧化石墨烯表面，然后加入丙烯酰胺和N，N-亚甲基双丙烯酰胺，通氮气除氧，再加入过硫酸铵和N，N，N’，N’-四甲基乙二胺，18～25℃交联反应20～30h，离心分离洗涤，最后用醋酸和醋酸钠的混合液洗脱模板分子，得到蛋白质印迹复合材料；硼酸基功能化氧化石墨烯与模板糖蛋白的质量比为1∶5～2∶1，丙烯酰胺和N，N-亚甲基双丙烯酰胺的质量比为12∶1～6∶1，过硫酸铵和N，N，N’，N’-四甲基乙二胺的质量比为25∶1～10∶1，硼酸基功能化氧化石墨烯、丙烯酰胺和过硫酸铵的质量比为5∶3∶1～1∶3∶1；其中PBS缓冲溶液的pH值为6.5～8.5，醋酸和醋酸钠的混合洗脱液的pH值为2.5～4.5。

2.根据权利要求1所述的一种用于富集与分离糖蛋白的分子印迹复合材料的制备方法，其特征在于：所得到的分子印迹复合材料利用了硼亲和作用和分子印迹效果专一性识别模板糖蛋白，且可以通过调节pH来调节硼亲和作用的强弱，来满足其在糖蛋白的专一识别、富集、纯化、分离和检测方面的应用。