[发明专利]一种豆芽中尿素及总氨氮的检测方法

说明书

技术领域

本发明化学领域，特别是涉及一种豆芽中尿素及总氨氮检测方法。

背景技术

豆芽的正常生产周期多为11～15天左右，可一些商贩为了提高豆芽产量，缩短生产周期，往豆芽上喷洒尿素、硝酸铵、硫酸铵和无根剂等化肥和激素催生。尿素是人体正常新陈代谢的产物，是一种含氮的小分子物质，会随着人体排尿而排出，少量尿素并不会对人体造成危害，当尿素大量聚集而不能排出时，会对人体造成损伤，主要是使人体的体内电解质平衡被破坏，从而产生疾病，即尿毒症。另外这些铵类化合物，在细菌的作用下，可以转变成亚硝胺，而亚硝胺是一种致癌物质。加强对芽菜的监控工作，寻求快速准确的快筛方法是大量样品筛选的市场需求。

目前，尿素检测方面主要有一下几种方法：

1)二乙酰一肟显色法

二乙酰一肟法原理是：强酸加热的条件下，尿素与二乙酰反应生成红色的原二嗪，颜色深浅与尿素含量呈正比。此法所用的试剂易得，成本低，但检测操作时需加热，线性范围低，一般不适用于现场快速检测。更重要的是此种方法在豆芽尿素测定中，豆芽中成分干扰较大，易造成假阳性。

2)邻苯二甲醛法

邻苯二甲醛法测定尿素原理是：在酸性条件下，尿素与邻苯二甲醛的结合物在安替比林存在的条件下，生成黄色的化合物，这种黄色的化合物与偏钒酸根结合呈蓝色。此法不需煮沸，操作简单，干扰因素少，但此方法试剂不易长时间保存，不宜于做成快检产品。

3)对二甲氨基苯甲醛法

对二甲氨基苯甲醛法原理是：在酸性溶液中，尿素与对二甲氨基苯甲醛生成柠檬黄色的二氨基苯甲醛脲。该方法稳定性、线性良好，干扰少、操作方便，但其灵敏度不高，一般用于乳制品、饲料等方面的尿素检测。

4)亚硝酸盐-格里斯试剂法

尿素与亚硝酸盐在强酸性条件下反应生成氮气，格里斯试剂与亚硝酸盐反应生成红色化合物。含有尿素的反应液红色会偏淡，根据溶液颜色与标准液的颜色来判断是否存在尿素。该方法可用于对尿素的定性，反应的灵敏度为0.2％，达不到豆芽中尿素的测定要求。

考虑到以上方法试剂稳定性、物质干扰、灵敏度、方便性等方面的缺陷，寻找一种操作简便、灵敏度高、结果准确、成本低、实用快速的豆芽尿素检测方法是食品安全方面大量样品筛选的市场需求。脲酶是一种高效的尿素分解催化剂，尿素经脲酶酶解生成NH4+，根据铵根离子水解PH变化而引起的酸碱指示剂如甲酚红、邻苯甲酚络合剂、甲基麝香草酚蓝等变色或通过水杨酸-靛酚蓝、苯酚-靛酚蓝等法测NH4+来对尿素间接定量是研究热点之一。

酸碱指示剂间接测定法与待测液PH、缓冲液缓冲能力等有很大的关系，其检测限为20mg/L尿素以上。水杨酸-靛酚蓝、苯酚-靛酚蓝法原理是亚硝基铁氰化钠催化NH4+与酚及次氯酸根反应生成蓝色化合物，根据颜色深浅对尿素间接定量，此种方法灵敏度高，但反应时间较长，不宜于做快筛产品。而纳氏试剂法与NH4+反应迅速，摇匀后即可比色，脲酶与纳氏试剂结合间接测尿素含量大大提高了检测灵敏度和快筛效率。

发明内容

本发明的目的是克服以上方法试剂稳定性、物质干扰、灵敏度、方便性等方面的缺陷，提供一种操作简便、灵敏度高、结果准确、成本低、实用快速的豆芽中尿素及其总氨氮检测方法。

本发明的技术方案是：

一种豆芽中尿素及总氨氮的检测方法，其通过检测经脲酶分解尿素产生的氨氮，根据氨氮含量对尿素进行半定量，其检测尿素及总氨氮的方法包括以下步骤：

1)检测物为豆芽，将豆芽剪碎，加入水混匀，室温放置，中间不时摇动，得上清液为待测液；

2)分别取两份检测液，一份加入脲酶，另一份加入等体积的水，摇匀，室温催化；

3)向步骤2)中所述的两份反应液中分别加入纳氏试剂，摇匀；

4)步骤3)摇匀，观察反应液颜色，与色阶卡对比，对尿素含量半定量。

脲酶为豆类脲酶；所述豆类脲酶从黄豆、青豆、黑豆中提取。

所述豆类脲酶的制备方法为：向豆中加入水，浸泡过夜，加乙醇水溶液打浆，离心，上清液为豆类脲酶液，将上清液真空冷冻干燥得豆类脲酶。

步骤1)豆芽与水的比例为1:1-1:10。

步骤1)室温放置时间为2-15min。

步骤2)样品和脲酶用量比为0.5mL：20-200uL。

步骤2)脲酶活性为30～180U·mL^-1。

步骤2)脲酶催化时间为2-10min。

步骤3)显色剂的用量为20-200uL。

步骤4)摇匀后，0-10min内与色阶卡对比。