[发明专利]酸枣仁对照提取物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及中药质量控制技术领域，特别是涉及一种酸枣仁对照提取物及其制备方法和应用。

背景技术

酸枣仁，别名酸枣核、山枣仁。是鼠李科植物酸枣的干燥成熟种子。于秋末冬初采收成熟果实，除去果肉及核壳，收集种子，晒干而成。其生于向阳山坡、路旁，主要产于河南、河北、陕西、辽宁、山西、山东、云南等地。秋季果实成熟时采收，去果肉及硬核，取种子，生用或微炒用。

酸枣仁作为一种中药材，收载于中国药典中。中国药典分别对酸枣仁药材的皂苷类和黄酮类成分进行薄层色谱鉴别：其中，皂苷类成分的薄层鉴别方法为：取本品粉末1g，加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取酸枣仁皂苷A、B对照品，分别加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和的正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，立即检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。黄酮类成分的薄层鉴别方法为：取本品粉末1g，加石油醚(60～90℃)30ml，加热回流2小时，滤过，弃去石油醚液，药渣挥干，加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取酸枣仁对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取斯皮诺素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和的正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点。

但是，在该鉴别方法中，采用酸枣仁皂苷A、B对照品及斯皮诺素对照品、酸枣仁对照药材为对照，分别鉴别酸枣仁中皂苷类和黄酮类成分，这样的方法既提高了检测成本，操作又较为繁琐。

对于酸枣仁药材中有效成分的质量控制，中国药典采用高效液相色谱法分别对皂苷类和黄酮类成分进行了含量测定。但是，在该含量测定方法中，仍沿用常规的中药质量控制模式，即以酸枣仁皂苷A、B或斯皮诺素对照品等作为对照，对酸枣仁进行质量评价分析，这种模式评价指标相对单一，过分依赖中药化学对照品，不环保，检测成本高。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，制备一种酸枣仁对照提取物，并将其作为对照物应用于酸枣仁及含酸枣仁的中药制剂的质量控制中，具有反馈成分信息全面，且操作简便、检测成本低的优点。

一种酸枣仁对照提取物的制备方法，包括以下步骤：

粉碎：取酸枣仁药材，粉碎，得酸枣仁粗粉；

脱脂：取上述酸枣仁粗粉，置于超临界CO₂萃取装置的萃取釜中，以超临界CO₂萃取去除酸枣仁粗粉中的脂类成分，得药渣；

提取：取上述药渣，按照每克酸枣仁药材6ml-10ml的量加入体积百分浓度为40％-80％乙醇水溶液，加热回流1-4小时，过滤，得滤液；

大孔树脂纯化：将上述滤液浓缩后上样加至大孔吸附树脂柱上，以7-11个柱体积的体积百分浓度为0-10％的乙醇水溶液洗脱，弃去，再以3-5个柱体积的体积百分浓度为50％-70％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得酸枣仁对照提取物粗品；

硅胶纯化：取上述酸枣仁对照提取物粗品，以体积百分浓度为50％-70％的乙醇水溶液溶解，加入适量硅胶拌样，蒸干溶剂后上样至硅胶柱，先以20-30个柱体积的乙酸乙酯洗脱，弃去，再以40-60个柱体积的体积比为70:30-50:50的乙酸乙酯-甲醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得酸枣仁对照提取物。

上述酸枣仁对照提取物的制备方法，首先将酸枣仁以超临界CO₂萃取，去除其中的脂类成分，然后以50％-70％乙醇水溶液进行提取，再依次以大孔树脂和硅胶进行纯化，去除冗杂成分，最后得到具有特定成分的酸枣仁对照提取物。该提取物中不仅含有酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B等皂苷类成分，还含有斯皮诺素和6”’-阿魏酰斯皮诺素等黄酮类成分。因此，将该制备方法得到的酸枣仁对照提取物作为对照用于酸枣仁及含酸枣仁药味中药制剂的质量控制中，具有反馈成分信息全面的优点，并且，将该酸枣仁对照提取物作为对照使用，无需进行繁琐的前处理步骤，可以直接溶解后检测，具有操作简便、检测成本低的优点。