[发明专利]一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种天冬组织培养快速繁殖方法。

背景技术

羊齿天冬(Asparagus filicinusBuch.-Ham.ex D.Don)别名月芽一支蒿、千锤打、广麦冬、土百部、九重根等，为百合科多年生草本植物，以块根入药，具有润肺止咳、杀虫止痒、咯血止带之功效，并具有较强的抑瘤作用。羊齿天冬目前大多处于野生状态，但由于过度采挖利用，其资源濒临枯竭。

人工栽培的羊齿天冬主要靠种子和分株繁殖，但种子发芽率较低，分株繁殖中，每株只能分得3-5株带有根系的枝条，繁殖系数低。

发明内容

本发明的目的是提供一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良羊齿天冬种苗、满足生产需要。

本发明的技术方案是：一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

(1)外植体的选择与消毒：取羊齿天冬健壮植株新萌发的嫩芽作为外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，然后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；

(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于超净工作台内，切成长0.5-1.0cm的茎段，接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加0.5-1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5-1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚丁酸IBA、0.1-0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中添加0.1-1.0mg/L2，4二氯苯氧乙酸2,4-D 0.5-0.1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA0.1-1.0mg/L的赤霉素GA3、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

(5)生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养30天得到完整带根苗，其中MS生根培养基中添加0.5-4.0mg/L的萘乙酸NAA、的0.5-3.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

(6)炼苗移栽：将步骤(5)得到的完整带根苗在室温下炼苗4-7天，待表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，移栽到按质量比为蛭石：泥炭土＝1：1的基质中，生长一个月后移栽到大田。

本发明的突出优点在于：

(1)采用本发明所述组织培养方法对羊齿天冬进行繁殖，在短时间内可培育出大量优质羊齿天冬幼苗，其扩繁系数可达20-30倍，实现规模化生产，满足生产上的需要。

(2)采用本发明所述的培养方法得到的羊齿天冬丛生芽增殖系数达到20-30倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，生根率可达95％以上。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。

实施例1

本发明所述的羊齿天冬组织培养快速繁殖方法的一个实例，包括以下步骤：

(1)外植体的选择与消毒：取羊齿天冬健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，去外除叶后，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；