[发明专利]一种快速检测羊水中胎儿细胞VHL基因突变的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种快速检测羊水中胎儿细胞VHL基因突变的方法，其特征在于，包括：

通过提取羊水中胎儿细胞的DNA，获得DNA溶液；

对所述的DNA溶液进行母体遗传物质污染与否的检测，判断DNA溶液中是否存在母体遗传物质污染；

若判断DNA溶液中不存在母体遗传物质污染，则直接对胎儿细胞进行VHL基因突变检测；

若判断DNA溶液中存在母体遗传物质污染，则对羊水中胎儿细胞进行培养传代后再进行VHL基因突变检测；

所述VHL基因突变检测包括：

采用荧光原位杂交探针对所述羊水中胎儿细胞进行VHL基因大片段缺失的检测，获得所述胎儿细胞是否存在大片段缺失的检测结果。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述VHL基因突变检测还包括：

采用VHL基因的三个外显子VHL-1、VHL-2和VHL-3的扩增引物对5-7对所述DNA溶液进行VHL基因点突变、小片段缺失或插入、剪切位点突变的检测，获得所述DNA溶液中是否存在点突变、小片段缺失或插入、剪切位点突变的检测结果。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述母体遗传物质污染检测包括：

人工合成人类性别决定基因SRY和X染色体上的3个短串联重复序列DXS6797、DXS6807、AR的扩增引物对1-4；

利用所述扩增引物对1-4和所述DNA溶液建立PCR扩增反应体系，进行PCR反应，得到PCR扩增产物；

对所述PCR扩增产物中的SRY基因扩增产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳，对所述PCR扩增产物中的DXS6797、DXS6807和AR基因的扩增产物进行STR分析，根据所述SRY基因扩增产物的电泳结果和STR分析结果判断所述DNA溶液中是否存在母体遗传物质污染。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述人类性别决定基因SRY和X染色体上的3个短串联重复序列DXS6797、DXS6807、AR的扩增引物对1-4如SEQIDNO.1-8所示，分别为：

扩增引物对1：SRY-F：5’-gagtgaagcgacccatgaac-3’

SRY-R：5’-tcttgagtgtgtggctttcg-3’

扩增引物对2：DXS6797-F：5’-ttccctctctccctctgtct-3’

DXS6797-R：5’-acacacacccaaaaccagat-3’

扩增引物对3：DXS6807-F：5’-gagcaatgatctcatttgca-3’

DXS6807-R：5’-aagtaaacatgtataggaaaaagct-3’

扩增引物对4：AR-F：5’-tccagaatctgttccagagcgtgc-3’

AR-R：5’-gctgtgaaggttgctgttctccat-3’

其中，所述引物对2中DXS6797-F引物的5’端标记FAM荧光；

其中，所述引物对3中DXS6807-F引物的5’端标记FAM荧光；

其中，所述引物对4中AR-F引物的5’端标记FAM荧光。

5.如权利要求1所述的基因突变检测方法，其特征在于，所述采用荧光原位杂交探针对所述胎儿细胞进行VHL基因大片段缺失的检测包括：

利用已采集的羊水中胎儿细胞制备细胞涂片；

将所述荧光原位杂交探针置于杂交液中与所述细胞发生杂交反应，获得杂交产物；

洗涤所述杂交产物，并进行细胞核染色处理，获得核染色后的细胞涂片；

通过荧光显微镜观察所述核染色后的细胞涂片，判断待测样本的DNA是否发生了基因大片段缺失。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述荧光原位杂交探针上标有荧光信号，由具有SEQIDNO.15-20所示的碱基序列的探针引物进行PCR制备得到。