[发明专利]一种藻体中富里酸亚组分的分级提取方法

权利要求书

1.一种藻体中富里酸亚组分的分级提取方法，其特征在于，所述分级提取方法包括如下步骤：

步骤a、藻体预处理：

取风干后的藻体剔除杂物，在40-50oC温度条件下烘干，碾磨过筛，得到藻体粉末；

步骤b、藻体索氏提取：

将藻体粉末置于索式提取器中，依次用乙醚、丙酮、95%乙醇、二氧杂环己烷和去离子水为提取液进行索氏提取，所得固体标记为索提藻体；

步骤c、藻体氯化钙及酸洗：

用氯化钙溶液连续三次提取索提藻体，每次提取时均保持固液比为1：10，在40-60^oC条件下连续搅拌15-40min后，离心得到固体，标记为氯化钙处理藻体；

用盐酸溶液连续三次提取氯化钙处理藻体，每次提取时均保持固液比为1：10，每次均连续搅拌10-30min后，离心得到的固体，标记为盐酸处理藻体；

向盐酸处理藻体中加入去离子水，使固液比达到1：10，连续搅拌10-30min后，离心得到固体，标记为水洗盐酸处理藻体；

步骤d、藻体碳酸钠处理：

用碳酸钠溶液连续三次提取水洗盐酸处理藻体，每次提取时均保持固液比为1：10，每次提取时均在30-45^oC条件下连续搅拌30-50min；离心得到的固体，标记为碳酸钠处理藻体；

向碳酸钠处理藻体中加入去离子水，使固液比达到1：10，连续搅拌10-30min后，离心得到固体，标记为水洗碳酸钠处理藻体；

步骤e、藻体碱液提取：

向水洗碳酸钠处理藻体中加入去离子水，使其固液比达到1:3，用盐酸和氢氧化钠调节溶液pH值=6.0～8.0，然后在氮气保护下，向溶液中加入焦磷酸钠溶液，使溶液中固液比为1:10且焦磷酸钠浓度为0.1mol/L，然后将溶液连续搅拌4-6h，静置20-28h后，离心分离，得到上层清液1及焦磷酸钠提取藻体1；

在氮气保护下，向焦磷酸钠提取藻体1中加入焦磷酸钠溶液，使溶液中固液比为1:10且焦磷酸钠浓度为0.1mol/L，然后将溶液连续搅拌4-6h，静置20-28h后，离心分离，得到上层清液2及焦磷酸钠提取藻体2；

在氮气保护下，向焦磷酸钠提取藻体2中加入焦磷酸钠溶液，使溶液中固液比为1:10且焦磷酸钠浓度为0.1mol/L，然后将溶液连续搅拌4-6h，静置20-28h后，离心分离，得到上层清液3及焦磷酸钠提取藻体3；

在氮气保护下，向焦磷酸钠提取藻体3中加入去离子水，使溶液中固液比达到1:5，用盐酸和氢氧化钠调节其pH值介于6.0～8.0之间，然后向溶液中加入氢氧化钠溶液，使溶液中固液比为1:10且氢氧化钠浓度为0.1mol/L，然后将溶液连续搅拌4-6h，静置20-28h后，离心分离，得到上层清液4及氢氧化钠提取藻体1；

在氮气保护下，向氢氧化钠提取藻体1中加入氢氧化钠溶液，使溶液中固液比为1:10且氢氧化钠浓度为0.1mol/L，然后将溶液连续搅拌4-6h，静置20-28h后，离心分离，得到上层清液5及氢氧化钠提取藻体2；

在氮气保护下，向氢氧化钠提取藻体2中加入氢氧化钠溶液，使溶液中固液比为1:10且氢氧化钠浓度为0.1mol/L，然后将溶液连续搅拌4-6h，静置20-28h后，离心分离，得到上层清液6及氢氧化钠提取藻体3；

步骤f：分级富里酸亚组分粗品的浓缩：

用盐酸将步骤e中的上层清液1-6，共计6份上层清液分别调节至pH值等于1.0，然后分别加入氢氟酸，使每份酸化液中的氢氟酸浓度为0.3mol/L时，再分别搅拌4-6h，分别静置20-28h，离心分离，得到六份上层清液，分别将其标记为无硅富里酸亚组分溶液1～无硅富里酸亚组分溶液6，共计6份无硅富里酸亚组分溶液；

将上述6份无硅富里酸亚组分溶液分别以15倍柱体积/h流速通过XAD—8树脂柱进行吸附；吸附完成后，用去离子水以15倍柱体积/h的流速分别淋洗每份无硅富里酸亚组分所吸附的XAD—8树脂柱，弃去流出液，然后再依次用1倍柱体积的0.1mol/L氢氧化钠溶液和2倍柱体积的去离子水以3倍柱体积/h的流速淋洗每份无硅富里酸亚组分所吸附的XAD—8树脂柱，得到的流出液再通过氢离子饱和的氢型阳离子交换树脂交换，最终流出液分别标记为富里酸亚组分1～富里酸亚组分6，共计六份富里酸亚组分溶液；

将富里酸亚组分1～富里酸亚组分6溶液分别冷冻干燥，最终得到六份固体富里酸亚组分分级样品。