[发明专利]一种藻体中富里酸亚组分的分级提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及藻体分离提取技术领域，具体涉及一种藻体中富里酸亚组分的分级提取方法。

背景技术

富里酸是腐殖质的一个重要组分部分，它能溶于酸、碱和中性溶液，是水体、土壤有机质重要组成部分。富里酸的结构非常复杂，元素组成和化学结构随时空和来源而变化。富里酸在环境地球化学及全球生态系统中具有重要作用，前人对于海洋、河水、废水等各种来源富里酸的地球化学特征开展了广泛的研究，已经取得了一系列进展。一般认为：富里酸是由动植残体经过复杂的物理、化学及生物过程形成的大分子有机混合物，而对活体生物体，包括藻体中富里酸的研究较少。

为了更近一步的研究富里酸的结构和组成，前人将富里酸亚组分进行分级分离，从而减小其异质性，取得一系列成果。目前针对土壤富里酸亚组分的分级分离技术有一定的报道，土壤富里酸分离方法分为两个过程：（1）富里酸的提取过程：从土壤中提取富里酸；（2）富里酸亚组分分级过程：基于不同组成和结构富里酸亚组分与XAD—8的结合能力不同进行分离。例如Dai等首先将土壤富里酸吸附在XAD—8树脂上，然后利用三种不同pH有机缓冲液、水及乙醇淋洗树脂，得到5种富里酸亚组分分级样品（Dai,J.,Ran,W.,Xing,B.,Gu,M.&Wang,L.CharacterizationoffulvicacidfractionsobtainedbysequentialextractionswithpHbuffers,water,andethanolfrompaddysoils.Geoderma135,284–295(2006).）；Li等利用四种不同比例甲醇和盐酸溶液淋洗树脂，得到4种土壤富里酸亚组分分级样品（Li,A.,Hu,J.,Li,W.,Zhang,W.&Wang,X.Polaritybasedfractionationoffulvicacids.Chemosphere.77,1419–1426(2009).）；Bai等利用5种不同pH的焦磷酸钠缓冲溶液淋滤树脂，得到5种土壤富里酸亚组分分级样品（BaiY.,WuF.,XingB.,MengW.,ShiG.,MaY.&GiesyJ.IsolationandCharacterizationofChineseStandardFulvicAcidSub-fractionsSeparatedfromForestSoilbyStepwiseElutionwithPyrophosphat.ScientificReports.5,8723|DOI:10.1038/srep08723(2015)）。但针对藻体富里酸的分级提取尚无报道。藻体中富里酸亚组分可能和藻体组分分为不同的结合形态和不同的结合强度。前人的富里酸亚组分分级过程与富里酸亚组分存在状态无关，不能反映富里酸亚组分的赋存状态和理化性质；也不能实现富里酸亚组分的提取过程和分级过程的统一。

本发明专利利用焦磷酸钠和氢氧化钠分别对富里酸亚组分进行多次分级提取，通过多次分离完成对藻体中的富里酸亚组分的充分提取，同时实现了富里酸亚组分分级过程与提取过程。

发明内容

为充分实现对藻体中的富里酸亚组分的分离富集，本发明公开了一种藻体中富里酸亚组分的分级提取方法，通过该方法，分级提取藻体中的富里酸亚组分，并制备了一系列分级提取的富里酸亚组分样品，以供后续研究使用。

本发明公开了一种藻体中富里酸亚组分的分级提取方法，所述分级提取方法包括如下步骤：

步骤a、藻体预处理：取风干后的藻体剔除杂物，在40-50oC温度条件下烘干，碾磨过筛，得到藻体粉末；

步骤b、藻体索氏提取:将藻体粉末置于索式提取器中，依次用乙醚、丙酮、95%乙醇、二氧杂环己烷和去离子水为提取液进行索氏提取，所得固体标记为索提藻体；

步骤c、藻体氯化钙及酸洗：用氯化钙溶液连续三次提取索提藻体，每次提取时均保持固液比为1：10，在40-60oC条件下连续搅拌15-40min后，离心得到固体，标记为氯化钙处理藻体；

用盐酸溶液连续三次提取氯化钙处理藻体，每次提取时均保持固液比为1：10，连续搅拌10-30min后，离心得到固体，标记为盐酸处理藻体；

向盐酸处理藻体中加入去离子水，使固液比达到1：10，连续搅拌10-30min后，离心得到固体，标记为水洗盐酸处理藻体；

步骤d、藻体碳酸钠处理：用碳酸钠溶液连续三次提取水洗盐酸处理藻体，每次提取时均保持固液比为1：10，在30-45oC条件下连续搅拌30-50min后，离心得到固体，标记为碳酸钠处理藻体；