[发明专利]一种热启动Taq酶的热启动效率表征方法在审
| 申请号： | 201510587021.2 | 申请日： | 2015-09-15 |
| 公开（公告）号： | CN105177111A | 公开（公告）日： | 2015-12-23 |
| 发明（设计）人： | 周宇荀;李晓宁;林天音;王斯佳;李文文;肖君华;李凯 | 申请（专利权）人： | 东华大学 |
| 主分类号： | C12Q1/48 | 分类号： | C12Q1/48 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达 |
| 地址： | 201620 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 启动 taq 效率 表征 方法 | ||
1.一种热启动Taq酶的热启动效率表征方法，包括：
(1)在配制完成的PCR体系中，不加入dNTP，将该反应体系在PCR仪上完成热变性以后，加入dNTP作为对照；在另一加入修饰后热启动Taq酶的扩增体系中直接加入dNTP，进行同时扩增，反应结束后，用琼脂糖电泳检测PCR产物，比较两种操作中引物二聚体和非特异性扩增产物产生的情况，对热启动效率进行评估；
(2)通过不同的热变性时间对活性的影响，对修饰得到的热启动Taq酶的效果进行半定量的评估；
(3)经修饰得到的热启动Taq酶，在热变性的过程中释放活性，通过设定相同的热变性时间，检测不同的PCR体系中，累积相同的可被检测到的产物量所需要的循环数，对修饰的效果进行半定量的评估；
(4)通过比较普通Taq酶和热启动Taq酶在多重扩增中产物的差异，对修饰效果进行定量评估；
(5)通过设置不同的热变性时间的关系，比较普通Taq酶与热启动Taq酶的扩增能力恢复情况与热启动时间，对修饰效果进行评估。
2.根据权利要求1所述的一种热启动Taq酶的热启动效率表征方法，其特征在于，所述步骤(1)中热变性的条件为95℃，15分钟。
3.根据权利要求1所述的一种热启动Taq酶的热启动效率表征方法，其特征在于，所述步骤(1)中扩增为热循环92℃15s,57.4℃1min,72℃1min,35个循环；补平72℃10min。
4.根据权利要求1所述的一种热启动Taq酶的热启动效率表征方法，其特征在于，所述步骤(2)中热变性时间梯度为95℃，0-20min。
5.根据权利要求1所述的一种热启动Taq酶的热启动效率表征方法，其特征在于，所述步骤(4)中多重扩增为预变性95℃2min和15min对照组；热循环92℃15s,60.1℃1min,72℃1min，35个循环；补平72℃10min。
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