[发明专利]一种锥栗优势共生菌根菌的人工培养方法

权利要求书

1.一种锥栗优势共生菌根菌的人工培养方法，其特征在于，所述锥栗优势共生菌根菌为与锥栗根系共生的橙黄硬皮马勃；所述方法包括以下步骤：

(1)组织分离：采集野生的锥栗优势共生菌根菌的子实体；从所述子实体的菌盖与菌柄交汇处，取菌肉组织块；

(2)菌丝培养与提纯：将所述菌肉组织块接种在改良MMN平板培养基上，置于25～28℃下培养至菌肉组织块萌发出菌丝，将所述菌丝转接至新的改良MMN平板培养基上，在25～28℃下培养至菌丝长满平板，获得纯化菌丝；

本步骤所述改良MMN平板培养基的pH值为5～6，包括以下成分：CaCl₂ 0.04～0.06g，MgSO₄ 0.12～0.16g，NaCl 0.02～0.03g，浓度为1％的FeCl₃ 1.0～1.5ml，KH₂PO₄ 0.4～0.6g，Vitamib B1 80～120μg，KNO₃ 0.20～0.30g，12Be′的麦芽汁80～120ml，甘露醇15～20g，柠檬酸0.15～0.25g，琼脂15～20g，蒸馏水900ml；

(3)液体发酵培养：挑取所述纯化菌丝，接种到改良MMN液体培养基中，在25～28℃下振荡培养10～15天，获得菌液；

本步骤所述改良MMN液体培养基的pH值为5～6，包括以下成分：CaCl₂ 0.04～0.06g，MgSO₄ 0.12～0.16g，NaCl 0.02～0.03g，浓度为1％的FeCl₃ 1.0～1.5ml，KH₂PO₄ 0.4～0.6g，Vitamib B1 80～120μg，KNO₃ 0.20～0.30g，12Be′的麦芽汁80～120ml，甘露醇15～20g，柠檬酸0.15～0.25g，蒸馏水900ml；

(4)菌种扩大培养：将所述菌液接种到扩大培养料中，在25～28℃下培养至菌丝长满培养容器，收集所述菌丝，即得；

本步骤所述扩大培养料中包含草炭土、玉米粉和珍珠岩；三者的质量比为草炭土：玉米粉：珍珠岩＝6～8：1～2：1～2。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，每100ml改良MMN液体培养基中接种4～6个由所述纯化菌丝组成的菌饼，每个菌饼直径3～7mm。

3.根据权利要求1～2任意一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，菌液以40～50ml/100g接种到扩大培养料中。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述采集锥栗优势共生菌根菌子实体时，采集中等成熟的子实体，并连同子实体附近土壤及锥栗根系一起采集。