[发明专利]一种从Cohn组分Ⅳ沉淀中分离纯化α2-巨球蛋白的方法

权利要求书

1.一种从Cohn组分Ⅳ沉淀中分离纯化α2-巨球蛋白的方法，其特征在于，将Cohn组分Ⅳ沉淀依次经过硫酸铵盐析、超滤脱盐、锌离子亲和层析、凝胶过滤和超滤浓缩，最终得到α2-巨球蛋白；所述硫酸铵盐析中硫酸铵的饱和度为40-60％，所述超滤浓缩中选用的超滤膜的截留量在30-500kD之间；所述硫酸铵盐析为单次盐析；

所述锌离子亲和层析中纯化介质选用锌离子螯合高流速琼脂糖介质Zn-IDA QZT6FF。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述硫酸铵盐析中硫酸铵的饱和度为45％-55％。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述硫酸铵盐析为加入硫酸铵后搅拌1小时，再离心15分钟。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述锌离子亲和层析中洗脱液选用pH为6.5-7.0的0.1M Na₂EDTA或pH为7.4的20mM Tris+0.1M NaCl+0.1-0.5M咪唑。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述凝胶过滤中过滤介质选用聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶-200HR(Sephacryl-200HR)、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶-300HR(Sephacryl-300HR)、琼脂糖凝胶、或交联葡聚糖Sephadex G-200。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述琼脂糖凝胶选用Superose prep grade或Superose 12。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述超滤浓缩中选用的超滤膜的截留量在50-100kD。

8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

a).硫酸铵盐析：将Cohn组分Ⅳ沉淀溶解于8-12倍体积的蒸馏水中，通过压滤获得压滤液，在压滤液中添加硫酸铵，使其饱和度达到40％-60％，离心得到沉淀与上清，弃上清；

b).超滤脱盐：将步骤a)得到的沉淀溶解于透析液中超滤进行脱盐，所述透析液为pH6.0-7.0的0.02M Tris+0.5M NaCl缓冲液；

c).锌离子亲和层析：脱盐后进行锌离子亲和层析，至蛋白峰降至基线时停止洗脱，收集亲和层析的洗脱液；纯化介质选用锌离子螯合高流速琼脂糖介质Zn-IDA QZT6FF；

d).凝胶过滤：将步骤c)得到的亲和层析的洗脱液进行凝胶过滤，收集第一蛋白峰的凝胶过滤的洗脱液；

e).超滤浓缩：将步骤d)得到的凝胶过滤的洗脱液中蛋白浓度浓缩至4.5-5.5％，再使用0.22μm滤器过滤除菌，即得到目标蛋白。

9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，步骤c)中的洗脱选用pH6.5-7.0的0.1MNa₂EDTA。

10.根据权利要求8所述方法，其特征在于，步骤d)的凝胶过滤主要包括以下几个步骤：ⅰ)装柱：将过滤介质填装在层析柱内；ⅱ)缓冲过滤介质：使用平衡缓冲液平衡缓冲过滤介质；ⅲ)上样：将步骤c)得到的亲和层析的洗脱液泵入层析柱内；ⅳ)淋洗：使用平衡缓冲液将目标蛋白α2-巨球蛋白淋洗下来。

11.根据权利要求8或9或10所述方法，其特征在于，所述超滤脱盐中选用的超滤膜的截留量在30-500kD之间。

12.根据权利要求11所述方法，其特征在于，所述超滤脱盐中选用50-100kD孔径的超滤膜。