[发明专利]一种线纹海马微卫星家系鉴定的方法

权利要求书

1.一种线纹海马微卫星家系鉴定的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1. 构建线纹海马家系，并将子代进行单独饲养；

S2. 对步骤S1中的亲本和子代进行DNA提取；

S3. 微卫星标记在S2步骤中的亲本和子代的DNA进行PCR扩增；

S4. 采用基因分析仪对步骤S3的微卫星PCR扩增产物进行基因型分型；

S5. 对步骤S4中的数据读取和分析，鉴定各子代的亲本来源；

S6. 依据海马子代实际的家系信息对步骤S5的分析结果进行可靠性检测；

其中，所述S3中微卫星标记的引物如下所示：

H.ere-6 引物：F：ACCTGCTACCAACCACAA

R：AACAAGGCAACCACTCATT

H.ere-17 引物：F：GTTGATGCGACCCACGAT

R：GCCTTGCTCCTTCTCTACG

H.ere-18 引物：F：CCAGTTAGCATTGCGTCT

R：TCTTAGCCAGCGAGTGTT

H.ere-15 引物：F：TGATGGTTGTGTGAGAAGGA

R：GAGAGAAAAAGACGGCGA

H.ere-20 引物：F：CGGGGTAGCAAGGTGAGC

R：CAAGGGGACATTGAAGTAGG

H.ere-22 引物：F：TGCCATCATCGCTAACTAA

R：TGCCAAAGACACAAAAAGG

H.ere-30 引物：F：TGCCGAATGATGATACAC

R：AATGACGCAATGAGAACA

H.ere-14 引物：F：TGAGTCGGTGATGGTTGTG

R：AAAGACGGCGAGAGATAGG

H.ere-26 引物：F：AGTGGGTGTCTCTGTAAAC

R：CCTTCGCAGTATTCATTG。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4中PCR扩增产物进行混合再进行基因型分型。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用醋酸铵/异戊醇法对步骤S2中的亲本和子代的鳍条进行DNA提取。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3中的微卫星标记的引物进行5’端荧光基团修饰。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3中的微卫星标记PCR扩增的反应体系为10 μL，包括：50 ng基因组DNA，1× PCR缓冲液，浓度为1.5 mmol/L的Mg²⁺，1 U Taq酶，dNTPs 0.2 mmol/L，正反引物均为0.25 μmol/L。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3中的微卫星标记PCR扩增的PCR反应程序为：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，退火30 s，72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸8min，最后4℃保存。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4中基因型分型的方法为ABI3730XL基因分析仪毛细管电泳分型。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S5中用GeneScan^TM 500 ROX^TM SizeStandard作为内参，并用GeneMapper 4.0软件读取基因型；步骤S5中所读取的数据采用CERVUS 3.0软件对亲本和子代的基因型进行分析，判定子代的亲本。