[发明专利]一种线纹海马微卫星家系鉴定的方法

说明书

本发明属于鱼类育种技术领域，具体涉及一种线纹海马微卫星家系鉴定的方法。其步骤包括：1）构建线纹海马家系，并将每一个家系的子代进行单独饲养；2）亲本和子代DNA提取；3）微卫星标记在亲本和子代中进行PCR扩增；4）采用基因分析仪对微卫星进行基因型分型；5）数据分析，鉴定各子代的亲本来源；6）依据子代海马实际的家系信息对该方法进行可靠性检测。本发明首次在线纹海马中建立了亲子鉴定的方法，其鉴定准确率达到了97.37%。通过该方法，可以控制在线纹海马驯养和选育中的近亲繁殖现象，提高种质水平，促进我国海马养殖产业可持续、健康高效的发展。

技术领域：

本发明属于鱼类育种技术领域，更具体地，涉及一种线纹海马微卫星家系鉴定的方法。

背景技术：

海马，属海龙科(Syngthidae)、海马属(Hippocampus)，是一种名贵海洋中药材，在我国素有“南方人参”之称，具有补肾壮阳、强心催产、止血镇痛、镇静安神的功效，同时还很高的观赏价值和收藏装饰品的功能。在过去几十年中，由于长期过度捕捞、环境污染和气候变化等因素，海马种质资源受到严重退化的威胁，有些海马种甚至到了灭绝的边缘。为了有效保护海马的种质资源，38种海马被列入《世界自然保护联盟》(IUCN)2012年濒危动物红色名录。线纹海马(Hippocampus erectus Perry,1810)主要分布在大西洋西岸，是典型的热带亚热带型海马种群，其繁殖力强、个体较大、体型优美，其生长速率最快，目前已经发展为我国主要的养殖品种之一。然而，在没有科学系统的计划下的生产经营，海马经过多代的繁殖后，经常会表现出体型变小、性早熟、生长速度减缓、繁殖效率及抗病力下降等现象，种质退化的现象非常严重。发明人所在团队在2010-2014年期间，连续对我国部分沿海的海马资源及其养殖现状进行综合调研后，发现我国海马繁殖和养殖模式极其原始，还是非常传统的混养、混交，遗传 谱系不清晰，近交衰退严重，直接导致了大部分海马繁殖效率、后代生活力和生长速度降低。根据实际调查发现，亲本的产卵数量较原代下降了30-60％，幼体成活率仅15-25％，幼海马的生长速度较原代下降30％左右。因此，为了避免或最大限度降低线纹海马的近交衰退，保持清晰的系谱信息对于家系的选育和亲本的管理至关重要。

传统的水产动物选择育种中，不同的家系需要分养来维持家系信息，所需水体大且不便管理，而且，每个分养池之间在环境因子上会存在一些差异，对育种相关的遗传参数估计会产生偏差。在混合养殖群体中保持家系信息，大多数畜牧以物理标记为手段，而物理标记对于水产动物存在操作繁琐、对生长有一定影响及对幼体伤害较大等局限性。分子标记的出现使得混养亲缘关系的鉴定成为可能，以微卫星为基础的亲子鉴定技术是目前水产动物系谱确认中应用最广泛最可靠的手段之一。已应用到虹鳟、罗非鱼、黄颡鱼、团头鲂、大菱鲆和凡纳滨对虾等水产经济动物育种中。目前，尚未见微卫星标记应用于线纹海马家系鉴定的报道。

发明内容

本发明解决的技术问题是克服现有线纹海马家系鉴定中的不足，提供了一种线纹海马微卫星家系鉴定的方法。

本发明的技术目的通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种线纹海马微卫星家系鉴定的方法，包括如下步骤：

S1.构建线纹海马家系，并将子代进行单独饲养；

S2.对步骤S1中的亲本和子代进行DNA提取；

S3.微卫星标记在S2步骤中的亲本和子代的DNA进行PCR扩增；

S4.采用基因分析仪对步骤S3的微卫星PCR产物进行基因型分型；

S5.对步骤S4中的数据读取和分析，鉴定各子代的亲本来源；

S6.依据海马子代实际的家系信息对步骤S5的分析结果进行可靠性检测；。

优选地，所述S3中采用的微卫星标记的引物序列如下所示：