[发明专利]胆汁螺杆菌的实时荧光定量PCR检测方法在审
| 申请号： | 201510598372.3 | 申请日： | 2015-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN105154551A | 公开（公告）日： | 2015-12-16 |
| 发明（设计）人： | 伍妙梨;黄韧;郭鹏举;张钰 | 申请（专利权）人： | 广东省实验动物监测所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/06;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 胡辉 |
| 地址： | 510663 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胆汁 螺杆 实时 荧光 定量 pcr 检测 方法 | ||
1.一种胆汁螺杆菌实时荧光定量PCR检测方法的引物，其核苷酸序列如下所示：
引物F：TACCACTGGAATGTAAAAGGCA（SEQIDNO：1）；
引物R：CTTCTTTTAGCGTTACATACGGAGT（SEQIDNO：2）。
2.一种胆汁螺杆菌实时荧光定量PCR检测方法的探针，其核苷酸序列如下所示：
探针P：CCACAAGTCCATGCGGCAACAGAAG（SEQIDNO：3）。
3.根据权利要求2所述的探针，其特征在于：探针5’端添加了荧光报告基团FAM序列，3’端添加了荧光淬灭基团BHQ序列。
4.一种胆汁螺杆菌的实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括下列步骤：
提取待测样品DNA作为模板，利用权利要求1~2所述的引物和探针进行实时荧光定量PCR检测，鉴定样品中是否含有胆汁螺杆菌。
5.一种胆汁螺杆菌的实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括下列步骤：
1）构建包含胆汁螺杆菌保守基因序列的质粒作为阳性标准品，制作标准曲线；
2）提取待测样品DNA作为模板，与所述标准曲线以相同条件，利用权利要求1~2所述的引物和探针进行实时荧光定量PCR检测，根据样品Ct值与标准曲线做比对进行定量分析。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：所述实时荧光定量PCR检测采用的PCR反应体系为：
PremixExTaq（ProbeqPCR）（2×）10μL
10μM引物F0.5μL
10μM引物R0.5μL
5μM探针P0.8μL
RoxReferenceDyeII（50×）0.2μL
模板2μL
ddH2O6μL
总体积20μL。
7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：所述实时荧光定量PCR检测扩增程序为：第一阶段预变性，95℃30s，重复1个循环；第二阶段PCR反应，95℃5s，60℃34s，重复40个循环。
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