[发明专利]快速磁分离电化学免疫传感及检测金黄色葡萄球菌的方法

权利要求书

1.快速磁分离电化学免疫传感的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：

(1)CdTe量子点的制备：

6mM巯基丙酸(MPA)加入到2mMCdCl₂溶液中，用1M的NaOH溶液将PH调整到9.0，通入N₂混合30min，再缓慢加入0.0625MNaHTe溶液，形成暗黄色CdTe量子点；所获得的量子点溶液回流10h，可达粒径为2.6nm，浓度4.7μM；将制成的量子点溶液通过4℃条件下15000g超滤10min以除去过量的巯基丙酸，并反复润洗两次，最后用pH7.4的PBS定容，并置于4℃的冰箱中保存；

其中步骤（1）中各反应物按照Cd²⁺/MPA/HTe^-物质量比为1:3:0.5添加；

(2)CdTe量子点功能化：

取合成好的CdTe量子点溶液（4.7μM），浓度为5mg/ml的金黄色葡萄球菌抗体，以及交联试剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)固体颗粒，混合室温下搅拌1h，离心分离后，放置4℃的冰箱保存；

其中步骤（2）中CdTe量子点溶液/金黄色葡萄球菌抗体的体积比为15:1，金黄色葡萄球菌抗体/EDC/NHS的质量比为1:6:6；

(3)磁性纳米球功能化：

按照体积比为15:1取实验室制备好的PBS缓冲溶液（pH7.4），浓度为5mg/mL金黄色葡萄球菌抗体，Fe₃O₄固体粉末以及交联剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，在室温下混合反应1h，离心分离后放置4℃的冰箱保存；

其中步骤（3）中PBS缓冲溶液（pH7.4）/金黄色葡萄球菌抗体的体积比为15:1，金黄色葡萄球菌抗体/Fe₃O₄固体粉末/EDC的质量比为1:6:6；

(4)工作电极预处理：

将裸电极依次用去离子水、无水乙醇和去离子水分别超声10min，再依次用粒径为1μm、0.3μm、0.05μm的氧化铝粉末反复打磨至镜面，然后分别置于乙醇、去离子水中超声清洗10min，最后用氮气吹干备用；

(5)工作电极的修饰以及传感器的制备：

取37℃条件下培养，经梯度稀释后的金黄色葡萄球菌，加入步骤（3）抗体功能化磁珠(Fe₃O₄-Ab)，室温下加入转子搅拌反应10min后，加入步骤（2）抗体功能化的量子点(QDs-Ab)，室温下反应30min；反应结束之后，取出转子，在磁铁上静置吸附20min；用移液枪小心取出上层清液，并加入试验室自制HNO₃（0.1M），并超声40min；

其中金黄色葡萄球菌、Fe₃O₄-Ab、QDs-Ab以及HNO₃各体积比为2:1:1:2.5，用PBS清洗电极表面后，将其浸入1~2mLHAC/NaAC（pH4.6）溶液中，转子搅拌均匀。

2.根据权利要求1所述的快速磁分离电化学免疫传感的制备方法，其特征在于，其特征在于其中步骤（1）中各反应物按照Cd²⁺/MPA/HTe^-物质量比为1:3:0.5添加。

3.根据权利要求1所述的快速磁分离电化学免疫传感的制备方法，其特征在于，其特征在于其中步骤（2）中CdTe量子点溶液/金黄色葡萄球菌抗体的体积比为15:1，金黄色葡萄球菌抗体/EDC/NHS的质量比为1:6:6。

4.根据权利要求1所述的快速磁分离电化学免疫传感的制备方法，其特征在于，其特征在于其中步骤（3）中PBS缓冲溶液（pH7.4）/金黄色葡萄球菌抗体的体积比为15:1，金黄色葡萄球菌抗体/Fe₃O₄固体粉末/EDC的质量比为1:6:6。

5.根据权利要求1所述的快速磁分离电化学免疫传感的制备方法，其特征在于，其特征在于其中步骤（5）金黄色葡萄球菌、Fe₃O₄-Ab、QDs-Ab以及HNO₃各体积比为2:1:1:2.5，用PBS清洗电极表面后，将其浸入1~2mLHAC/NaAC（pH4.6）溶液中，转子搅拌均匀。

6.权利要求1所述的快速磁分离电化学免疫传感对金黄色葡萄球菌高灵敏检测方法，其特征在于：快速磁分离电化学免疫传感器工作曲线的建立以及快速磁分离电化学免疫传感器对实际牛奶样品的检测；所制备的快速磁分离电化学免疫传感器工作曲线为：当金黄色葡萄球菌浓度为2.21×10²~2.21×10⁷CFUmL^-1时，其线性方程为：y=0.9934x-0.3526，检测限为：83CFUmL^-1。