[发明专利]华南紫萁离体再生体系建立的方法

权利要求书

1.华南紫萁离体再生体系建立的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)外植体采集与表面消毒：剪取华南紫萁孢子叶，进行表面消毒；

(2)孢子无菌萌发：分离孢子叶上的孢子囊群，将其接种于孢子萌发培养基上进行培养；

(3)原叶体增殖培养：将步骤(2)孢子萌发形成的原叶体剪切至增殖培养基中进行原叶体增殖培养；

(4)孢子体的诱导：将步骤(3)形成的原叶体粉碎转接至孢子体诱导培养基诱导产生幼孢子体；

(5)生根培养与炼苗：将步骤(4)诱导的幼孢子体分离出来，转接至生根培养基诱导孢子体形成不定根；

(6)移栽：取出步骤(5)的孢子体幼苗，洗去根部附着的凝胶培养基，将幼苗移栽入经高温灭菌的基质中。

2.根据权利要求1所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法，其特征在于：在华南紫萁孢子囊群色泽黄褐，孢子叶轴尚呈黄绿色新鲜状态时，剪取孢子叶，及时处理新鲜材料。

3.根据权利要求1所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法，其特征在于：孢子萌发培养基配方为：改良Beneck基本培养基+0~15g/L蔗糖+6-苄氨基嘌呤(6-BA)0.2mg/L+2,4二氯苯氧乙酸（2,4-D）0.1mg/L+琼脂7g/L。

4.根据权利要求1所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法，其特征在于：步骤（3）中，增殖培养基配方为：改良Beneck基本培养基+15g/L蔗糖+6-BA0~0.5mg/L+2,4-D0.1mg/L+琼脂7g/L。

5.根据权利要求1所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法，其特征在于：步骤（4）中，孢子体诱导培养基配方为：改良Beneck基本培养基+赤霉素（GA₃）0~1.2mg/L+5g/L蔗糖+琼脂7g/L+水解酪蛋白100mg/L。

6.根据权利要求1所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法，其特征在于：步骤（5）中，生根培养基配配方为：改良Beneck基本培养基+10g/L蔗糖+6-BA0.05mg/L+2,4-D0.1mg/L+琼脂7g/L；发现不定根根尖突出后，随即在培养室内松开、虚掩瓶盖10d，期间生根培养基因水分较快消耗而收缩，但不致干涸。

7.根据权利要求3、4、5或6所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法，其特征在于：改良Beneck基本培养基配方为：NH₄NO₃200mg、KH₂PO₄100mg、MgSO₄·7H₂O100mg、CaCl₂100mg、KI0.83mg、H₃BO₃6.2mg、MnSO4·4H₂O22.3mg、ZnSO₄·7H₂O8.6mg、Na₂MoO₄·2H₂O0.25mg、CuSO₄·5H₂O0.025mg、CoCl₂·6H₂O0.025mg、FeSO₄·7H₂O27.8mg、Na₂-EDTA·2H₂O37.3mg。

8.根据权利要求1、2、3、4、5或6所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法，其特征在于：离体培养体系建立的培养条件为12h光照+12h黑暗，光照强度2500Lx，25±2℃。

9.根据权利要求1、2、3、4、5或6所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法，其特征在于：幼苗移栽所采用的基质为草炭︰蛭石=3︰1，经高温灭菌后使用。

10.根据权利要求1、2、3、4、5或6所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法，其特征在于：孢子体诱导培养基配方为：改良Beneck基本培养基+GA₃0.8mg/L+5g/L蔗糖+琼脂7g/L+水解酪蛋白100mg/L。