[发明专利]华南紫萁离体再生体系建立的方法在审

专利信息
申请号: 201510605402.9 申请日: 2015-09-22
公开(公告)号: CN105230483A 公开(公告)日: 2016-01-13
发明(设计)人: 蔡奇英;杨志旺;王保忠;刘以珍;葛刚 申请(专利权)人: 南昌大学
主分类号: A01H4/00 分类号: A01H4/00
代理公司: 南昌洪达专利事务所 36111 代理人: 刘凌峰
地址: 330000 江西省*** 国省代码: 江西;36
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摘要:
搜索关键词: 华南 紫萁离体 再生 体系 建立 方法
【权利要求书】:

1.华南紫萁离体再生体系建立的方法,其特征在于包括以下步骤:

(1)外植体采集与表面消毒:剪取华南紫萁孢子叶,进行表面消毒;

(2)孢子无菌萌发:分离孢子叶上的孢子囊群,将其接种于孢子萌发培养基上进行培养;

(3)原叶体增殖培养:将步骤(2)孢子萌发形成的原叶体剪切至增殖培养基中进行原叶体增殖培养;

(4)孢子体的诱导:将步骤(3)形成的原叶体粉碎转接至孢子体诱导培养基诱导产生幼孢子体;

(5)生根培养与炼苗:将步骤(4)诱导的幼孢子体分离出来,转接至生根培养基诱导孢子体形成不定根;

(6)移栽:取出步骤(5)的孢子体幼苗,洗去根部附着的凝胶培养基,将幼苗移栽入经高温灭菌的基质中。

2.根据权利要求1所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法,其特征在于:在华南紫萁孢子囊群色泽黄褐,孢子叶轴尚呈黄绿色新鲜状态时,剪取孢子叶,及时处理新鲜材料。

3.根据权利要求1所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法,其特征在于:孢子萌发培养基配方为:改良Beneck基本培养基+0~15g/L蔗糖+6-苄氨基嘌呤(6-BA)0.2mg/L+2,4二氯苯氧乙酸(2,4-D)0.1mg/L+琼脂7g/L。

4.根据权利要求1所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法,其特征在于:步骤(3)中,增殖培养基配方为:改良Beneck基本培养基+15g/L蔗糖+6-BA0~0.5mg/L+2,4-D0.1mg/L+琼脂7g/L。

5.根据权利要求1所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法,其特征在于:步骤(4)中,孢子体诱导培养基配方为:改良Beneck基本培养基+赤霉素(GA3)0~1.2mg/L+5g/L蔗糖+琼脂7g/L+水解酪蛋白100mg/L。

6.根据权利要求1所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法,其特征在于:步骤(5)中,生根培养基配配方为:改良Beneck基本培养基+10g/L蔗糖+6-BA0.05mg/L+2,4-D0.1mg/L+琼脂7g/L;发现不定根根尖突出后,随即在培养室内松开、虚掩瓶盖10d,期间生根培养基因水分较快消耗而收缩,但不致干涸。

7.根据权利要求3、4、5或6所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法,其特征在于:改良Beneck基本培养基配方为:NH4NO3200mg、KH2PO4100mg、MgSO4·7H2O100mg、CaCl2100mg、KI0.83mg、H3BO36.2mg、MnSO4·4H2O22.3mg、ZnSO4·7H2O8.6mg、Na2MoO4·2H2O0.25mg、CuSO4·5H2O0.025mg、CoCl2·6H2O0.025mg、FeSO4·7H2O27.8mg、Na2-EDTA·2H2O37.3mg。

8.根据权利要求1、2、3、4、5或6所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法,其特征在于:离体培养体系建立的培养条件为12h光照+12h黑暗,光照强度2500Lx,25±2℃。

9.根据权利要求1、2、3、4、5或6所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法,其特征在于:幼苗移栽所采用的基质为草炭︰蛭石=3︰1,经高温灭菌后使用。

10.根据权利要求1、2、3、4、5或6所述的华南紫萁离体再生体系建立的方法,其特征在于:孢子体诱导培养基配方为:改良Beneck基本培养基+GA30.8mg/L+5g/L蔗糖+琼脂7g/L+水解酪蛋白100mg/L。

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