[发明专利]石龟活性肽精制法及在预防肝硬化、抗疲劳中的应用

权利要求书

1.石龟活性肽精制法，其特征在于，包括如下步骤：

1)原料预处理：将石龟处死，去头，剔除内脏，洗涤3-4次，粉碎，用醋酸调pH 2-3，10℃以下浸泡24h，待膨胀均匀后取出，用水反复清洗2-3次至无酸味，沥干，加水8-10倍打浆，至匀浆液，加水补足失重；

2)酶解：向步骤1)得到的匀浆液中加入1％柠檬酸作为酶解法提取介质，调节pH为3，加入2％的胃蛋白酶，4℃下酶解6h，每1h采用磁力搅拌机搅拌15min，加热，灭酶活，得石龟酶解液；

3)多级膜分离纯化：

①微滤：取步骤2)得到的石龟酶解液，加水稀释至质量分数为10％，用0.3μm膜微滤，操作压力为0.2MPa；

②一级超滤：将步骤①得到的滤液通过20kD超滤膜超滤，操作压力0.2-0.25MPa，超滤2-3次；

③二级超滤：将步骤②所得滤液再采用10kD超滤膜在0.8MPa操作压力下超滤2次，得到透过液，高压灭菌，减压浓缩干燥；

④定期膜清洗：反应一段时间后，超滤膜有凝胶层，膜通量会降低，进行膜清洗，先用水冲洗15min，至透过液无色无味，加0.5％氢氧化钠反复冲洗15min，水洗至滤过液为中性；

4)灭菌、干燥，得石龟活性肽粉末。

2.根据权利要求1所述的石龟活性肽精制法，其特征在于：步骤1)所述的醋酸的添加量为1:20。

3.根据权利要求1所述的石龟活性肽精制法，其特征在于：步骤2)所述的搅拌，采用磁力搅拌机搅拌。

4.权利要求1-3中任一所述石龟活性肽精制法得到的石龟活性肽。

5.权利要求4所述的石龟活性肽在制备预防肝硬化、抗疲劳药物中的应用。