[发明专利]脂蛋白(a)多克隆抗体的制备方法

权利要求书

1.脂蛋白(a)多克隆抗体的制备方法，包括：基因的克隆、基因的表达、重组蛋白的纯化、免疫动物和纯化抗体，其特征在于：通过KringleIV1片段序列作为免疫原制备脂蛋白(a)多克隆抗体。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述免疫原采用酵母表达系统分泌表达。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述基因的克隆方法为：设计一对含限制性酶切位点的引物，扩增脂蛋白(a)基因的KringleIV1片段，用限制性内切酶切割酵母分泌表达载体的质粒DNA和KringleIV1片段DNA，然后体外使两者相连接，再用所得到重组质粒转化细菌，验证正确后提取重组质粒，转化酵母菌感受态细胞。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述重组蛋白的纯化方法为：先浓缩含重组质粒的酵母菌发酵培养液，然后浓缩液按照先疏水，后阴离子交换层析，再分子筛纯化，获得重组蛋白纯品。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述免疫动物的方法为：首次免疫采用弗氏完全佐剂将纯化的蛋白进行乳化，每只小鼠注射一定量纯化的蛋白，然后采用弗氏不完全佐剂乳化纯化的蛋白，以21天为间隔进行第2-3次免疫。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述纯化抗体的方法为：利用饱和硫酸铵法初步纯化血清，然后再用溴化氰活化的琼脂糖4B偶联脂蛋白(a)蛋白做亲和层析。